文档介绍：A40926高产菌株的选育及发酵工艺优化
基本介绍
•化合物 A 4 0 9 2 6 为
放线菌 N o n o m u r a e a sp .39727
产生的一种天然糖肽类化合物。
•A40926是多组分化合物,含有4个主要组分—PA、PB、A和B,其中A40926B(图1)是达巴万星的主要前体物质。
•达巴万星(dalbavancin)是一种新型半合成糖肽类抗生素,它是继万古霉素和替考拉宁之后的第二代具有抗多重耐药菌活性的糖肽类抗生素。
•研究发现达巴万星对由革兰阳性菌尤其是葡萄球菌、肠球菌和肺炎链球菌所致的严重感染性疾病的治疗有很好的效果。
研究的目的与意义
1、目前该品种的发酵单位较低,不适合工业化生产。
2、通过菌种选育与发酵工艺优化,提高A40926发酵产量。
选育方法
采用紫外线和亚硝基胍两种方法诱变,结合抗生素抗性筛选方法,对A40926的产生菌Nonomuraea sp. SIPI-H3020进行诱变选育。
发酵工艺优化
1、优化A40926的发酵培养基配方和培养条件,并在50L发酵罐上优化补料工艺
2、以原始工艺为对照,在摇瓶中通过对不同接种方式、不同种子种龄、不同接种量、不同发酵初始pH、不同摇瓶装料量、不同转速及不同温度等因素的考察,确定最佳培养条件,并根据摇瓶优化结果在50L罐上进行补料工艺优化。
过程
UV诱变
↓
单孢子悬液的制备
↓
最低抑菌浓度(MIC)的测定
↓
抗性菌株的筛选
研究结果
1、本研究结果表明,采用紫外线和亚硝基胍两种诱变手段,并结合抗生素抗性筛选方法,对A40926的产生菌SIPI-H3020进行诱变选育能够较大程度地提高目标产物的发酵单位。
2、筛选得到一株高产突变株Nonomuraea sp. SIPI-H5972,其发酵效价比出发菌株提高了257%。
3、在优化的摇瓶发酵工艺下,突变株SIPI-H5972的发酵效价达到990µg/mL,又提高了153%。
4、通过补料工艺优化,在50L发酵罐中发酵效价为1223 µg/mL,%。
研究分析
1、不同诱变剂剂量与致死率的关系
1、由表1~2可见,两种诱变剂的诱变剂量与菌株的致死率之间存在着明显的剂量效应关系,即随着诱变剂量的加大致死率逐渐提高。
2、当紫外照射时间超过90s时,致死率达到90%以上。出发菌株对NTG非常敏感,%时致死率大于90%。
由图2可见,UV诱变剂量为90s时,正突变率最大,负突变率最小。
由图3可见,随着处理剂量的增加,正突变率有所提高。