文档介绍:1、分离培养基采用MRS培养基, 分离培养基中添加溴甲酚紫作为指示剂;
采用稀释平板涂布法进行平板涂布分离, 挑取直径在115mm以下能使培养基中溴甲酚紫变红或变黄的单菌落, 菌落表面光滑的菌株,采用划线法进行分离纯化,获得纯种。
2、MRS 固体培养基:蛋白胨10g,肉膏10g,酵母提取物5g,柠檬酸二铵2g,乙酸钠5g,K2HPO4 2g,MnSO4·4H2O ,MgSO4·7H2O ,葡萄糖20g,吐温80 1mL,琼脂25g,水1000mL。~,1% CaCO3,121℃灭菌15min。
改良MRS培养基:向MRS培养基中加入1% CaCO3。
10 倍比稀释至10-10,,涂布于含钙MRS 培养基平板上,37℃静置培养48h。
挑取含钙培养基上具有明显钙溶圈的菌落,划线分离纯化2~3 次,最后选择单菌落,经镜检确认为纯种
3、MRS 固体培养基: 蛋白胨10g, 牛肉膏10g, 酵母提取物5g, K2HPO4 2g, 柠檬酸二铵2g, 乙酸钠5g, 葡萄糖20 g, 吐温-801mL, MgSO4 #7H2O , MnSO4 , 琼脂25g,蒸馏水1000mL, ~ , 3%的CaCO3, 121℃灭菌20min。
稀释倾倒平板法分别接种于MRS固体培养基上,30 ℃培养24h
30℃培养24h, 在MRS+3%CaCO3 固体培养基上形成明显的透明圈, 表面
光滑湿润。
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5、培养基 MRS液体培养基(pH5. 0) , 富集培养用; 改良MRS固体培养基() : 在培养基成分中,加入2%的CaCO3
菌种分离方法先在MRS( pH5. 0) 液体培养基中进行富集培养, 18~24h后采用改良的MRS固体培养基进行稀释平板法分离,挑取生长在平板中下层且具溶钙圈的乳白色菌落,按常规方法进行纯化,获得纯菌。
改良TJA培养基双层琼脂培养法
乳酸菌的分离纯化
分离
(1)配制BCG牛乳培养基,分装三角瓶,包扎,灭菌备用。
BCG牛乳培养基配制
A溶液:脱脂乳粉100g,水500ml,%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液1ml,80℃灭菌20min。(%溴甲苯酚绿(BCG)