广藿香的抗补体活性成分.doc

文档介绍：广藿香的抗补体活性成分
[摘要] 采用硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱方法对广藿香进行抗补体活性导向分离与鉴定,从乙酸乙酯部位和正丁醇部位共分离鉴定了15个黄***、1个三萜和2个酚酸类成分,包括5-羟基-3,7,3′,4′-四甲氧基黄***(1)、5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基-二氢黄***(2)、5,4′-二羟基-3,7,3′-三甲氧基黄***(3)、5-羟基-3,7,4′-三甲氧基黄***(4)、5,4′-二羟基-7,3′-二甲氧基黄***(5)、木犀草素(6)、槲皮素-7,3′,4′-三甲醚(7)、岳桦素(8)、3,5,7-三羟基-3′,4′-二甲氧基黄***(9)、槲皮素(10)、芹菜素(11)、山柰酚(12)、5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄***(13)、山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(14)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷-7-O-α-L-鼠李糖苷(15)、齐墩果酸(16)、香草酸(17)、对***苄醇(18),其中化合物5,7,8,12~15,18均为首次从唇形科刺蕊草属植物中分离得到。对所得单体化合物进行经典和旁路途径的体外抗补体活性测定,并利用补体缺失血清鉴定活性最强化合物的抗补体作用靶点,结果表明,化合物3,7,10,12,16对经典和旁路途径的补体激活均有抑制作用(CH50 ~ g·L-1,AP50 ~ g·L-1),而化合物5,6仅对经典途径有抑制活性;活性最强的槲皮素-7,3′,4′-三甲醚(7)作用于补体系统的C1q,C2,C5和C9组分,值得深入研究。
[关键词] 广藿香;化学成分;抗补体活性;黄***;槲皮素-7,3′,4
′-三甲醚
广藿香Pogostemon cablin (Blanco) ,多年生草本,全草药用[1]。我国的广藿香主要由越南、马来西亚等国家引种,现主要分布于广西、广东、海南和云南等地[2]。广藿香为临床常用的芳香化湿中药,具有芳香化湿、开胃止呕、发表解暑的功效,是消化系统疾患及暑湿时令之常用药,主治湿浊中阻、脘痞呕吐、暑湿倦怠、胸闷不舒、寒湿闭暑、腹痛吐泻、鼻渊头痛等[3]。广藿香主要含挥发油、黄***、倍半萜等成分[4-5],其中挥发油类化合物具有调节肠胃功能[6]、抗细菌[7]、抗病毒[8]等药理作用,而黄***类化合物主要具有抗炎活性[5]。已有研究表明,传染性非典型肺炎(SARS)、急性呼吸窘迫综合症、系统性红斑狼疮等很多重大疾病的发生发展都与补体系统的过度激活相关,从中草药中寻找高效低毒的天然补体抑制剂对于这些疾病的治疗具有重要意义[9]。本课题组前期研究发现,广藿香醇提物具有很强的补体抑制活性(CH50 g·L-1,AP50 g·L-1),但迄今未见对广藿香中抗补体活性成分的研究报道。因此,本文以体外抗补体活性为导向,从广藿香的乙酸乙酯和正丁醇2个活性部位中分离得到18个化合物,包括15个黄***(1~15)、1个三萜(16)和2个酚酸类(17, 18)成分。其中,化合物5,7,8,12,13,16~18均为首次从唇形科刺蕊草属植物中分离得到。采用细胞溶血法测定了所有化合物对经典和旁路途径的抗补体活性,并选择活性最强的槲皮素-7,3′,4′-三甲醚(7)进行了抗补体作用靶点研究,为广藿香在治疗补体过度激活相关疾病方面的应用和开发提供了科学依据。
1 材料
X-型双目显微熔点测定仪(南京皓海仪器仪表公司);JASCOP-1020数字旋光仪(JACSOP公司,日本);HP-5989A质谱仪(PaloAlto,美国);DRX-400型核磁共振仪(Bruker,瑞士);EYELA-RE-2000A型旋转蒸发仪(东京理化,日本);TDL-4型低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂);Well scan MK3型酶标仪(Thermo Labsystems,芬兰);WMZK 8002型恒温振荡器(上海医用仪器厂);DR FLASH型中低压制备色谱(苏州利穗科技有限公司)。
柱色谱硅胶(100~200,200~300,300~400目,青岛海洋化工厂);薄层硅胶GF254(青岛海洋化工厂);Sephadex LH-20 (Pharmacia Biotech);ODS填料(AA12S75,YMC公司);D-101型大孔树脂(河北宝恩化工有限公司);试剂均为分析纯;氘代试剂(Adamas 公司)。
广藿香药材于2011年11月购自河北省安国市冷背药材有限公司,产自广东,,凭证标本(DFC-GHX-20111120)存于复旦大学药学院生药学教研室药材标本室。
豚鼠(200~250 g)和新西兰兔(~3