文档介绍：描曲线、扫描电镜结果,选择蛳胶体金颗粒标记抗体。通过试验胶体金标记抗体将浓度为拿庖呓禾褰鹁韧坎荚诰埘ツど希涠掣稍锖笾频谩摘要地恋砗蚐层析柱结合的方法进行纯化,结果显示∞恋砗蛃纠;检测时间短,层析细菌性食物中毒严重危害人类健康,预防和控制细菌性食物中毒的重要措施之一是快速、准确的检测致病菌。传统的检测以细菌培养、形态学、生理生化等方法为基础;操作程序复杂、耗时长。研究快速检测势在必行。本实验首先通过免疫家兔分别制备了沙门氏菌、副溶血性弧菌、大肠杆菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌的五种抗血清,除副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌抗血清外,其他三种抗血清基本涵盖了该菌绝大多数的致病血清型。将制备的抗血清采用层析柱结合纯化的抗体,纯度和活性均可满足标记胶体金的需要。采用柠檬酸三钠还原制备了三种不同粒径的胶体金,根据颜色、波长扫的最低稳定蛋白量为蜭,最适为;根据最低稳定蛋白量和最适标记抗体制得免疫胶体金,低温超速离心纯化,通过免疫渗滤装置检测五种免疫胶体金,具有活性。将胶体金垫、层析膜、样品垫、吸水垫组装制成免疫层析条。胶体金垫是通过比较选用镜腍作为层析用膜,质控线采用二抗蚩雇浓度为痬觳庀呶4炕亩嗫寺】⑽垫均采用吸水性好的材料。五种层析条分别检测阳性菌株阳性率均为ィ觳庖性菌株除大肠杆菌检测条有非特异性反应外,其它层析条均无非特异性反应;五种层析条灵敏性有差异,但基本可达到/~条可在左右显示清晰的条带:稳定性良好,封闭在有干燥剂的塑料袋中可常温保存鲈隆单纯的层析条检测灵敏度较低。因此,采用实验室自制的纳米免疫磁颗粒,对难放ḿ缓蟛捎婕尤将菌体与磁颗粒分离,再用层析条检测。随后将层析条与免疫磁颗粒结合组装成“细菌性食物中毒快速检测试剂盒”。初步应用检测牛肉中的大肠杆菌,大肠杆菌检测条呈阳性,其它层析条均为阴性,灵敏度比单纯应用层析条检测可提高达鍪考丁总之,本课题制备了检测沙门氏菌、副溶血性弧菌、大肠杆菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌的五种免疫胶体金层析条,并辅以免疫磁颗粒组装成“常见细菌性食物中毒快速检测试剂盒”。首次将纳米磁颗粒与胶体金免疫层析条检测相结合,证明该结合具有可行性,并且是一种灵敏度高、特异性强、快速、稳定的检测方法。为制备检测更多种细菌的食物中毒快速检测试剂盒奠定了基础。关键词:食物中毒;细菌;胶体金;快速检测;免疫层析。
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导师躲谘弗乏讫￡学位论文作者签名:己柄易立签字日期:豧年‘月』签字日期:!!月/签字日期:月,日独创性声明学位论文版权使用授权书他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得塑雅绦┡迢谆蚱渌本学位论文作者完全了解塑些盘些盘堂有关保留、使用学位论文的规阅和借阅。本人授权塑だ菪┡烫每梢越宦畚牡娜ú炕虿糠帜谌荼嗳胗泄本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ学位论文作者签名:学位论文作者毕业后去向:工作单位:通讯地址:邮编:电话:
细菌性食物中毒严重威胁人类健康“民以食为天,食以安为本”。然而,近年来世界范围内的食品安全恶性事件屡可引起食物中毒的细菌有沙门氏菌玬伽觯畇⒏比苎P曰【,鹌隹陧蔇莄⒗堪司邛闦淞肥淞⒈湫胃司把珊、金黄色葡萄球菌印砂淞脚姗⒅竞厥暇砌自妒如、肉毒梭菌瓠州砌棚屡发生,食源性疾病的发生率均居高不下。全球每年发生一亿例食源性腹泻,发展中匡颐磕暧万人口死于食源性腹泻,即使是在工业化国家,亦有%以上的人群患食源性疾病】。据美国ǖ溃拦磕暝加蛉嘶际吃葱约膊∑中巳朐褐瘟疲加怂劳。在我国,微生物污染食品是最重要的卫生问题之一⒌南妇允澄镏卸臼撬惺澄镏卸局凶钇毡椤⒆罹弑⑿缘囊恢食物感染Ⅲ。我国国家食源性疾病检测网~年共上报件食源性疾病暴发事件,涉及的患者人数达人。微生物引起的食源性疾病事件和涉及人数最多,%【。~年我均每年发生食物中毒起,发病人数为耍蚴澄镏卸镜贾滤劳人;微生物性食物中毒平均每年发生.,发病人数为.,其中导致人死亡年,我国卫生部共收