文档介绍：实验室菌种管理规程
目的:保证菌种合理、有效地使用和保存,最大限度降低变异率,确保菌种的溯源性与稳定性,保证实验室和社会的生物安全。
职责:主管负责菌种的出入库保管、保存、分发,组员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
范围:本规程适用于实验室菌种的管理,包括菌种的保存、传代、使用及销毁等。
1 菌种的保存
工作用菌种的保存
工作用菌种采用平板低温保存法。将菌种接种在适宜的固体培养基上,待菌生长充分以后,转移至2~8℃冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存,并应随时检查其污染杂菌和变异等情况,发现异常情况,经应灭活处理后销毁。保存时间为1周,超过该期限前挑取单菌落重新于琼脂平板划线活化,若菌落活力下降则从-80℃冰箱中取用甘油冷冻管。
传代用菌种的保存
采用甘油冷冻管保藏法。
甘油冷冻管保存法
用无菌接种环轻轻刮平板上的单菌落并接种至适宜的液体培养内,置于适宜的培养条件下培养,菌液充分振荡后取适宜体积加入到已灭菌的冷冻管内,再加入等体积的无菌甘油(浓度40%),即为20%甘油菌悬液,轻轻振摇,使内容物充分混合,在-80℃冷冻条件下保存,保存期限为3年。
每个菌株保存至少30个无菌冷冻管。使用时,取出一支放至室温,接种增菌培养或接种至琼脂平板复苏,挑取纯菌落传代或工作用。
2 菌种的传代
工作用菌种的传代
当工作用菌种代数小于5时,在规定保存期限内,可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。取在冰箱2~8℃保存的工作用菌种用普通琼脂平板传代,并将新传代的培养物替代原有的菌种,作为工作用菌种。也可取用“甘油冷冻管保藏法”保存的菌种,进行复苏,直接作为工作用菌种。菌种每1周传代一次,当超过5代,须用“甘油冷冻管保藏法”保存的原始菌种传代。
传代用菌种的传代
首先划线接种确认,根据日常检验工作的需要量,挑取纯菌落转接平板,作为工作用菌种;同时,结合菌种的代数和最长保存期限,挑取纯菌落制成菌悬液,按“”的方法制备甘油冷冻管数支,作为传代用菌种。
传代时注意事项
无菌操作,使菌株不死亡,不污染、不丢失。同时实验人员也要采取有效的预防措施进行自我保护,如工作时必须穿工作服,佩带无菌手套,实验完成以后消毒实验进行的区域、实验仪器和器具。如发生意外,如菌种泄漏或人员受伤,应立即向主管报告以便及时进行处理。
3 菌种的保管
实验室全部菌种都应由菌种负责人记录在册,并输入电脑以电子版形式存档,以便查找。菌种上应贴上明显的标签,标明名称、培养基、保种人、日期、编号等。
菌种设专人加锁保管,并对所保存的菌种建立《菌种保存、领用登记台账》(附表3)。
菌种的定期检查
在菌种的保存期间,应每天检查保存菌种冰箱的温度、菌种管的塞子是否松动或生霉,如有异常应及时处理。
所保管的菌种,不能随意转让其他单位和个人,需要时应有单位证明和批准手续以及李爱科组长签字方可供应。
4 菌种的领用与使用
实验室人员根据实验需要,需到主管领取工作用菌种或传代用菌种,同时填写《菌种领用登记台账》相关内容。
实验室人员从主管领取工作用菌种或传代用菌种,用于日常检验或验证试验,使用后及时填写《菌种使用登记台账》(附表6),以便追踪菌种使用历史。
5 菌种(废弃)的销毁
下列情况的菌种或培养物或被污染的器具等,必须采用121℃、45分钟湿热灭活处理:新一代菌种制备成功后的上一代菌种;使用完后的菌种和带有标准菌种的器具和培养物;超过有效期的菌种;凡被污染、变异、可疑等异常情况菌种;其他应废弃的菌种。
6 附则
附表1:《检定菌接收记录》
附表2:《检定菌种传代、分离记录》
附表3:《检定菌种保存、领用登记台账》
附表4:《检定菌种观察记录》
附表5:《检定菌种鉴定记录》
附表6:《检定菌种使用登记台账》
附表7:《废弃菌种(物品)销毁处理记录》
菌种资源详细信息(密)
此项信息不对外公布,保存核心成员手中。
菌种登记:编号+详细名称+来源+特性+动物实验+……,随时补充,留照片。
附表1:《菌种接收记录》
记录名称
菌种接收记录
代码
页次
1
共页
名称及编号
数量
代数
来源
接收日期
接收人
检查情况
保存条件
附表2:《菌种传代、分离、保存记录》
记录名称
菌种传代、分离记录
代码
页次
1
共1页
名称及编号
购进(领取)日期
年月日
来源
传代前菌种保存方法
传代用培养基
传代日期
传代用
菌种编号
总数量
传代用菌种
工作用菌种
操作人
数量
编号
有效期
保存
方法
数量
编号
有效期
保存
方法
分