文档介绍：负荷尿中维生素B2测定 ——荧光分析法
维生素B2(核黄素)
黄色粉末状结晶体,水溶液呈现黄绿色荧光。
酸性及中性环境中对热稳定,碱性环境中易被热和紫外线破坏
代谢活性形式:黄素单核苷酸(FMN),
黄素腺嘌呤二核苷酸辅酶(FAD)
生理功能:
1、参与体内生物氧化与能量代谢
2 、参与维生素B6和烟酸的代谢
3、其他生化反应,药物代谢等。
11/21/2018
维生素B2缺乏与过量
维生素B2缺乏:
口腔:口角炎,唇炎,舌炎,地图舌
皮肤:脂溢性皮炎
眼:对光有过度敏感的反应、视物模糊等
其他影响:干扰体内铁的吸收、贮存及动员
影响生长发育
一般核黄素不会引起过量中毒。
11/21/2018
食物中维生素B2来源
11/21/2018
实验目的
应用尿负荷试验评价人体维生素B2营养状况。
11/21/2018
实验原理
代谢角度:
--水溶性维生素,在机体内存留时间短,满足机体需求后,多余部分迅速从尿中排出。
--当日常摄入量达不到机体需要量时,摄入的维生素制剂将首先留在体内满足机体需要,从而尿中排出量较少,反之亦然。
因此,可由尿中排出的维生素量来判断体内水溶性维生素的水平。
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方法角度
--荧光化合物,在一定波长的光波照射下发黄绿色荧光。
--荧光强度F与溶液浓度C成线性关系—— F=KC
11/21/2018
仪器与试剂
荧光光度计
酸性水:,加蒸馏水稀释至200ml;
核黄素储备液(已配好):50μg/ml。酸性水配制,棕色瓶低温保存
核黄素标准应用液:1μg/ml。吸取核黄素储备液2ml,用酸性水稀释至100ml,棕色瓶低温保存,现用现配;
低亚硫酸钠(荧光熄灭剂)
11/21/2018
实验步骤
1 收集负荷尿
清晨排空小便后,空腹口服维生素B25mg,根据季节饮水200-500ml,收集服药后4h内所有尿液,并在瓶中加入1g左右草酸,使尿液保持在PH3-5,防止维生素B2降解,必要时还可加甲苯防腐。用量筒量取总尿液量并记录,做好标记后4℃短期保存,-20℃长期保存。
2 测定前读取尿液PH值,确保PH=3~5
3 负荷尿维生素B2测定
11/21/2018
负荷尿维生素B2的测定
标准管样品管
尿样(ml) 1 1
B2标准应用液(ml) 0
酸性水(ml) 9
混匀
荧光光度计读值(420、530nm) C A
低亚硫酸钠 1平匙 1平匙
混匀
背景荧光值(420、530nm) D B