文档介绍：样品提取液的提取: 称取新鲜植物组织2g,加入15ml无离子水研磨成匀浆,置于45℃振荡机中摇动浸提(或超声波)lh后用5ml无离子水冲洗干净,然后离心或过滤(如含色素需用活性炭脱色),滤液备用。
备注(lg的经验):可溶性糖、可溶性蛋白质、VC等需要研磨提取的简单指标也可以使用此提取液按比例测定。
 
1硝态氮的测定:
标准氮试剂:精称KNO3 ,溶于少量重蒸无离子水中,并定容至250ml,含N 量为500µgNO3一N/ml。
5%水杨酸一硫酸溶液:称取水杨酸5g,溶于100ml浓H2SO4()中,搅拌溶解后贮于棕色瓶内,冰箱中至多保存l周,最好现用现配。
 2mol/L NaOH溶液:称取NaOH 80g放入500ml硬质烧杯中,加入重蒸无离子水200ml,溶解后定容至l000ml。
操作方法
标准曲线制作取:50ml容量瓶6只(编号),依次加入标准氮试剂5、l0、l5、20、25、30ml,用无离子水定容,则成为50、100、l50、200、250、300 ug/ml的氮系列标准溶液;再取干沽50ml三角瓶7只,,(作为O 点);然后分别加入5%,混匀静置20--30min(显色);最后加入2mol/L NaOH溶液l9ml,混匀。冷却后利用751分光光度计,于410nm下比色,记录光密度(OD)值;并以OD 值为纵座标,以标准氮(0、50、l00、150、200、250、300 ug)为横座标,绘制一条标准曲线(通过原点的直线)。
+ 5%水杨酸一硫酸溶液,混匀静置20--30min(显色);最后加入2mol/L ,混匀。冷却后利用751分光光度计,于410nm下比色,记录光密度(OD)值;结果计算
按照公式A= CV1/(WV2) 计算。
式中:A—NO3一N含量(ug/g);W一样品重(g);V1一样品提取液总量(m1):V2一样品反应液数量(m1);C一样品在标准曲线上查得的N量(ug):
2亚硝态氮的测定:
NaN02 标准溶液:精称分析纯NaNO2 ,以无离子水溶解并定容至50ml,再吸取此溶液5ml定容至l000ml,作为母液,其浓度为5µgNO2一N/ml。
磺***试剂:称取分析纯磺***(或对氨基苯磺酸)l0g,加浓HCI 250ml(需用水浴加热溶解),用无离子水定容至lL。
ɑ一萘***试剂:称取分析纯ɑ一萘***2g,加浓HCI 250ml,溶解后定容至1L。
操作方法
标准曲线绘制:取干沽试管6支(0~5号),依次加入标准NaNO2母液0、、、、、,、、、、、0ml:摇匀后再在各管分别加入磺***试剂和ɑ一萘***试剂各2ml:摇匀后于35"(2水浴中显色30min,于520ml处比色,绘制出标准曲线。
lml样品提取液+2ml磺***试剂+2mlɑ一萘***试剂,摇匀后于35℃水浴中显色30min,于520ml处比色。
结果计算
按照公式A= CV/W计算。
式中:A— N02一N 含量(µg/g):
C一查标准曲线值(µg);
v一样品提取液总量(ml);
W一样品重(g)
 
3 游离氨基酸态氮的测定:
试剂:(1)乙酸-乙酸钠缓冲液(pH ):,加无氨蒸馏水到60ml刻度,水浴锅加热搅拌溶解。冷却后转入100ml容量瓶中加30ml冰醋酸,再用无氨蒸馏水稀释至100ml。
(2)水合茚三***试剂:***置烧杯中,加入75ml正丙醇,搅拌使其溶解。再加入150ml正丁醇及300ml乙二醇,最后加入45ml pH -乙酸钠缓冲液,混匀,贮于棕色瓶,置4℃下保存备用,10天内有效。
(3)标准氨基酸:称取80℃,溶于少量10%异丙醇中,用10%异丙醇定容至100ml。取此液5ml,用蒸馏水稀释至50ml,即为含5μg/ml 氨基氮的标准液。
(4)%抗坏血酸:称取50mg 抗坏血酸,溶于50ml无氨蒸馏水中,随配随用。
(5)10%乙酸。
样品制备
取新鲜植物样品,洗净,擦干并剪碎。混匀后,-,于研钵中加入5ml 10%乙酸,研磨匀浆后,用蒸馏水稀释至100ml。混匀,并用滤纸过滤到三角瓶中备用。
制作标准曲线
取6支20ml 刻度试管,按表操作
加完试剂后混匀,盖上大小合适的玻璃球,置沸水中加热15min,取出后用冷水迅速冷却并不时摇动,使加热时形成的红色被空气逐渐氧