文档介绍：CRISPR/Cas9 基因敲除技术

CRISPR (ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats)RNA,是最近几年才发现的原核生
物中的调控 RNA,用以抵御病毒和质粒入侵。在 II 型 CRISPR 系统中,CRISPR RNA(crRNA)与转录激
活 crRNA(Trans-activating crRNA, tracrRNA)退火形成的复合物能特异识别基因组序列,引导 Cas9 核酸
内切酶在目的片段生成 DNA 双链断裂(double-strand breaks, DSBs)。CRISPR-Cas 系统的高效基因组编辑
功能已被应用于多种生物,包括人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。多个科研小组的
研究都显示,与锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活样效应核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,
TALEN)相比较,CRISPR-Cas 系统介导的基因组靶向实验在真核细胞中具有相似甚至更高的效率。

Biomics 专注于 RNA 基因调控多年,最新推出基因组编辑工具 CRISPR/Cas9 专家系统,该系统灵活
简单、可以对特定基因组位点进行切割置换,特异性高、细胞毒性低。CRISPR/Cas9 系统可广泛应用于基
因组工程,如基因抑制,基因敲除,基因敲入,基因修复等。CRISPR-Cas9 体系的 RNA-DNA 识别机制为
基因组工程研究提供了一项简便而强大的工具。其最重要的优势是 Cas9 蛋白可在多个不同的 gRNA 的引导
下同时靶向多个基因组位点,起到多靶点调控的作用。
z CRISPR 与 RNAi 的区别
目前已经广泛应用的 RNAi 技术的靶标是 mRNA,而 CRISPR 通过 RNA 识别 DNA 序列然后再
改变 DNA 序列,是可以遗传的。由于编码 mRNA 的 DNA 序列只占总 DNA 的极少部分,因此靶向
DNA 序列的 CRISPR 的靶标要比 RNAi 广得多,更有可能筛选出针对某 DNA 序列的特异 CRISPR 靶
标。
作为一种新的基因编辑技术,CRISPR/Cas9 有以下特点和优势:
1、操作简单,靶向精确性更高。
sgRNA 靶向序列和基因组序列必须完全匹配,Cas9 才会对 DNA 进行剪切。编码 sgRNA 的序列不超过 100bp,因此比构建 TALENs 和 ZENs
更简单方便,用于 CRISPR 的 sgRNA 识别序列仅需 20 个核苷酸。
2、CRISPR/Cas9 系统是由 RNA 调控的对 DNA 的修饰,其基因修饰可遗传。
3、基因修饰率高,基因调控方式多样,例如敲除、插入、抑制、激活等
4、可实现对靶基因多个位点同时敲除。
5、无物种限制。
6、实验周期短,最快仅需 2 个月,节省大量时间和成本。

Biomics 提供以下 CRISPR/Cas9 专家系统服务
1、与客户协商根据靶序列设计 RNA 序列(3 个工作日);

Biomics 具有丰富的 sgRNA 设计