文档介绍：经典液相色谱法为基础,
引入气相色谱法的理论和实验技术,
高压输送流动相,
高效固定相及高灵敏度检测器,
现代液相色谱分析方法。
与经典液相色谱法相比
颗粒极细(一般为10m以下)、规则均匀的固定相,(键合相)传质阻抗小,柱效高,分离效率高;
高压输液泵输送流动相,流速快,分析速度快;
高灵敏度检测器,灵敏度大大提高。紫外检测器最小检测限可达109g,而荧光检测器最小检测限可达1012g。
与气相色谱法相比
不受试样的挥发性和热稳定性的限制,应用范围广;
可选用各种溶剂作为流动相,对分离的选择性有很大作用,选择性高;
一般在室温条件下进行分离,不需要高柱温。
第一节高效液相色谱法的主要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法
分配色谱法(partition chromatography)
吸附色谱法(adsorption chromatography)
离子交换色谱法(IEC)
空间排阻色谱法(SEC)
第一节高效液相色谱法的主要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法
分配色谱法(partition chromatography)
吸附色谱法(adsorption chromatography)
离子交换色谱法(IEC)
空间排阻色谱法(SEC)
化学键合相色谱法
其他色谱类型
亲合色谱法(affinity chromatography;AC)
手性色谱法(chiral )
胶束色谱法(micellar chromatography;MC)
电色谱法(electrochromatography;EC)
二、化学键合相色谱法
以化学键合相为固定相的色谱法,简称键合相色谱法(bonded phase chromatography;BPC)
化学键合相:采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相
优点:
固定相的均一性和稳定性好,在使用过程中不易流失,使用周期长;
柱效高;重现性好;
能使用的流动相和键合相的种类多,分离的选择性高
正相(normal phase,NP)和反相(reversed phase,RP)键合相色谱法:
根据化学键合相与流动相极性的相对强弱
(一)正相键合相色谱法
固定相:极性键合相
如氰基(-CN)、氨基(-NH2)或二羟基键合硅胶。(经典:水饱和的硅胶)
流动相:非极性或弱极性溶剂加极性调整剂
如烷烃加醇类。(与水不混溶的溶剂)
适用范围:溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物
如一些在硅胶柱上分离的物质
正相键合相色谱法
分离机制?
分配:把有机键合层作为一个液膜看待,溶质在两相的溶解吸附:溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作用
分离选择性:极性强的组分k大,后洗脱出柱。流动相的极性增强,洗脱能力增加,使组分k减小,tR 减小。