文档介绍：杨靖亚等副溶血弧菌单克隆抗体的研制与性质鉴定第期· ·
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· 免疫学技术与方法·
副溶血弧菌单克隆抗体的研制与性质鉴定①
杨靖亚陆晓帆张建孙晓红晁若瑜钱媛华上海海洋大学食品学院,上海
中国图:括分类号. 文献标识码文章文章编号
摘要目的:制备副溶血弧菌耐热直接溶血毒素单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法:用纯化的毒素
蛋白作为免疫原免疫/小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用间接方法进行阳性细胞筛选,有限稀释法
进行亚克隆。并对该单克隆抗体进行了分子量大小、效价、亚类、特异性和亲和力分析。结果:筛选出一株能够稳定分泌
单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为,其免疫球蛋白亚型鉴定为,亲和力常数可达.×/,并表现出较强的
特异性。抗体纯化后效价达:,—电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为和轻链。结论:成功
获得一株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,为开发免疫学快速检测方法提供重要实验基础。
关键词副溶血弧菌;单克隆抗体;杂交瘤细胞;亲和力常数

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副溶血弧菌是一种革发烧等临床症状。目前研究显示,副溶血弧菌的
兰氏阴性嗜盐细菌,其广泛分布于全世界的沿海岸主要致病因子是其产生的多种溶血毒素和尿素酶,
及海水中,主要来源于鱼、虾、蟹、贝类和海藻等海产分别有不耐热溶血毒素,
品中⋯。近年来副溶血弧菌引起食物中毒的发生、耐热直接溶血毒素—
规模以及人群暴露规模呈明显上升趋势,已成为世,、直接溶血相关毒素—
界各地由于食用了生的或未加工成熟的海产品而引,,其中耐热直接溶血毒素是主要的
起的食源性疾病的主要致病因素,大多数现腹致病因子。在临床分离菌株中大多表现为
泻、腹痛、恶心、呕吐等反应,少数表现出头痛、头晕、株,而株为% ~% ,少数副溶血弧菌具有
和双阳性,环境中分离菌株几乎无
,加
。该菌的血清分型抗原为型,抗原
①本文为上海市教育委员会科研创新项目和上海市教育
为型,其中已知与人胃肠炎有关的与的组
委员会重点学科建设项目
作者简介:杨靖亚年一,女,副教授,博士,硕士生导师,主要合有种。
从事海洋生物资源综合利用与海洋药物的开发、肿瘤药理本文以实验室自己制备的高纯度毒素蛋
学方面的研究,:..。白作为免疫原免疫小鼠,旨在筛选制得高效、特异性
中国免疫学杂志年第卷
强的副溶血弧菌的单克隆抗体,并对其进行生次免疫之后,对小鼠尾静脉采血,利用间接
物学特性分析鉴定,以期为建立针对的免疫学法测其血清效价,选取最佳免疫小鼠,当效价达到
检测方法奠定基础。:以上即可最后的加强免疫,三天之后分离
脾脏细胞与小鼠骨髓瘤/细胞进行细胞融合。
材料与方法
.. 细胞融合将骨髓瘤细胞与脾细胞按:
. 材料与试剂致病性副溶血弧菌的比例混合在一起,在离心管中用无血清不
标准菌株购于北京中原公司;沙门氏菌、大肠杆完全培养液清洗并以/离心
菌、单核细胞增多性李斯特菌、金黄色葡萄球菌、非分钟;随后弃去上清液,轻轻弹击离心管底,使细胞
致病性副溶血弧菌从南美白对