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农业生物技术学报
JournalofAgriculturalBiotechnology
2012,20(2):218~224
DOI:.1674-
技术改进
UpdatedTechnology
牛支原体的环介导等温扩增快速检测技术研究
侯轩付萍张海燕张跃伟吴文学*
中国农业大学动物医学院,北京 100193
* 通讯作者,******@cau.
摘要牛支原体(Mycoplasmabovis) 是感染牛的一种重要的致病性病原体。本研究利用环介导等温扩增
(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)技术建立了牛支原体的快速检测方法。该方法以牛支原体保
守性基因 uvrC 为靶序列设计了 5 条特异引物,在 58℃等温条件下,60min 即可完成反应。LAMP 方法能检
测出 20pg 牛支原体 DNA,较 PCR 方法高 100 倍,用牛鼻支原体()、无乳支原体( )、
精氨酸支原体()、牛副流感病毒(BPIV)、牛腺病毒(BADV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)作特异
性检测,两种方法均有很高的特异性。本研究还将荧光显色剂钙黄绿素(calcein)和 Mn2+ 用于 LAMP 反应结
果的可视化检测。临床鼻拭子样品煮沸后,可直接进行等温扩增,省去了 DNA 提取步骤。在对 167 个临床鼻
拭子样本的检测中,LAMP 方法检测结果阳性率(%)高于 PCR 方法检测出阳性率(%),这证明本研
究所建立的方法,与 PCR 法比较更适于临床样品的检测。研究结果表明,LAMP 方法具有操作简便、快速、高
效、敏感、特异、经济等特点,适于基层实验室监测的广泛使用。
关键词牛支原体(Mycoplasmabovis),环介导等温扩增(LAMP),PCR
DevelopmentofLoop-mediatedIsothermalAmplificationforRapid
Detectionof Mycoplasmabovis
HOUXuanFUPingZHANGHai-YanZHANGYue-WeiWUWen-Xue*
CollegeofVeterinaryMedicine,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100193,China
*Correspondingauthor,******@cau.
Abstract Mycoplasma bovis
newandrapidtestmethodfor Mycoplasmabovis withloop-mediatedisothermalamplification(LAMP).Withthe5
specificprimerstargetingtoatotalofsixdistinctsequencesontheconservativegene uvrC,thenewmethodcoul