文档介绍：, ,. ,.
· 实验研究·
荧光激活细胞分离技术在角膜缘干细胞研究中的应用
蔡海英柳林彭亮红

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摘要目的探讨荧光激活细胞分离技术在体外培养的兔角膜缘上皮细胞生物学特性研究中的应用。方
法收集新西兰白兔的角膜缘组织进行组织块培养。采用分离出体外培养的兔角膜缘上皮细胞中的侧群细
胞和非细胞。用% 锥虫蓝染色法对分离出的细胞进行克隆形成率检测以评估细胞的活性,用免疫组
织化学染色检测/和蛋白在细胞和非细胞中的表达。结果细胞在体外培养的兔角膜缘上皮
细胞中占.±.% ,分离出的细胞的为.±.% ,而非细胞为..% ,二者差异有统
计学意义., .;大部分细胞呈/抗原阴性,免疫标记呈阳性;而非细胞呈/抗
原阳性,免疫标记呈阴性。结论可以应用于体外培养的兔角膜缘上皮细胞的细胞分离,分离出的
细胞具有较强的增生能力。
关键词角膜缘上皮细胞;荧光激活细胞分离技术;侧群细胞;;/
分类号. 文献标识码文章编号——
荧光激活细胞分离技术—
作者单位:上海,第二军医大学附属长海医院眼科蔡海英
,是高纯度识别、分离稀有细胞群体的专
硕士研究生,现在上海市杨浦区中心医院眼科
通讯作者:柳林: . 项技术。侧群,细胞是指根据某些
眼科研究年月第卷第期
细胞具有一结合盒转运载体蛋白—的分离。
,排出染料.. 分离细胞的步骤收集消化后的细
使细胞荧光强度减弱的特性,采用胞,调整细胞密度为。个/,加入
分离出的一群细胞,有学者认为它可能是所有/,使其终质量浓度为/。吹打混匀后
成体干细胞的共同特性。角膜缘干细胞避光置于℃水浴箱中孵育,每晃动
,是角膜上皮增生的源泉,由于尚未发次离心管。对照组于此步骤中加入终浓度
现特异性的表面标志物,的分离尚未成功。本为/同时孵育。将细胞通过目筛网过
研究利用分离出体外培养的角膜缘上皮细胞中滤至一新的无菌离心管中。℃、/ 离心
的细胞,检测其生物学特性,为的进一步研究,弃上清。用含/的预冷重悬
提供理论依据。细胞并置于冰浴中,以排除死亡细胞对实验的影响。
立即上流式细胞仪分离细胞。激发波长,
材料与方法
采集波长为蓝光和红光,通过与
. 材料对照组比较,选取染色偏弱部分的细胞即为细胞。
健康新西兰白兔购于第二军医大学实验动物中收集分离出来的角膜缘组织细胞、非细胞于
心。细胞培养液/美国公司;特级孑板中,继续培养。
胎牛血清,美国公.. 免疫细胞化学鉴定对流式细胞仪分离的
司;一抗为鼠抗兔/抗体美国公细胞和非细胞,选取部分细胞种植于预先置有多聚
司;二抗为羊抗大鼠上海增健生物有限公司; 赖氨酸涂布盖玻片的孔培养板,贴壁后行
霍乱毒素、上皮生长因子, /、免疫细胞化学标记,以./
、转铁蛋白、染料、转代替一抗进行阴性对照实验。具体步骤:弃培养
运蛋白阻滞剂、碘化吡啶, 液,冲洗。