文档介绍：:..菠菜色素的提取与分离Extrctionssandisolationofpigmentsfromspinach余正波内蒙占师范大学生命科学与技术学院呼和浩特010020摘要:本实验用研钵和体积比为7:3石油醯■乙醇提取色素,使用硅胶柱层析法对叶绿素、胡萝卜素和叶黄素进行分离,以此了解天然物质分离提纯方法,了解柱层析的基本原理,掌握柱层析的操作技术。关键词:菠菜色素石油醸-乙醇分离硅胶柱层析菠菜中含有胡萝卜素、叶黄素和叶绿素等色素。叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂,主要以叶绿a和叶绿素b两种形式存在。胡萝卜素具有三种异构体,其中B-胡萝卜索除具冇维生索A的生理活性,作为维生索A使用外,还能清除体内口由基,提高人体免疫力,延缓细胞和机体衰老。叶黄素是一种类胡萝卜素,是天然的食品色素和食品营养剂,具有明显的抗氧化、抗衰老和抗突变等生物活性,此次实验采用硅胶柱层析对色素进行分离纯化。,了解天然物质分离提纯方法;了解柱层析的基本原理,掌握柱层析的操作技术。,加深了解微量冇机物色谱分离鉴定的原理。绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H7O6N4Mg),其差别仅是a中一个甲基被b中的甲酰基所取代。它们都是毗咯衍生物与金属镁的络合物,是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物屮叶绿素a的含量通常是b的3倍。尽管叶绿素分子屮含冇一些极性基团,但大的坯基结构使它易溶于瞇、石油瞇等一些非极性的溶剂。胡萝卜素(C40H56)是具有长链结构的共辄多烯。它有三种杲构体,即a-,B■和Y・胡萝卜索,其中B-异构体含量最多,也最重要。在生物体内,B・体受酶催化氧化即形成维生素A。目而B・胡萝卜素已可进行工业生产,可作为维生素A使用,也可作为食品工业中的色素。叶黄素(C40H56O2)是胡萝卜素的径基衍牛物,它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比,叶黄素较易溶于醇而在石油瞇屮溶解度较小。、离心机、三角瓶、试管、层析柱,抽滤瓶,烧杯,铁架台;硅胶,乙醇,丁醇,石油醯(60〜90°C),丙酮,菠菜叶。•…研磨离心•…菠菜汁…石油瞇乙醇萃取…萃取液…纯水洗涤、无水硫酸钠干燥…石油瞇浸膏…柱层析•…色带…洗脱…,用剪刀剪碎后放入研钵,充分研磨后加入约15mL7:3(体积比)的石油瞇/乙醇混合液,搅拌继续研磨约2min,然后用离心机离心分离(3500rpm,5min)菠菜汁,弃去滤渣。将滤液转入分液漏斗,加入30mL水萃取洗涤(分两次,每次15mL),以彻底除去萃取液屮的乙醇。洗涤时要轻轻旋荡,防止产生乳化。处于上层的右油瞇层用无水硫酸钠干燥后滤入试管。,从柱口小心装入活性硅胶(160・200H,于100-1io°c活化2小时),边装边轻轻敲打层析柱,使填装紧密均匀,直至硅胶粉柱高达8厘米时为止。