文档介绍：反相HPLC在药物分析中的应用
(成都● 2006/09)
曾伟杰
leo@
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● 方法开发前要确定的基本问题
● 色谱柱的选择
● 流动相的选择
● 样品前处理的新方法
● 色谱柱使用维护的建议
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● 方法开发前要确定的基本问题
1、分析物的物理、化学性质
样品基质----决定前处理方法
溶解性----决定正、反相方法
酸碱性----确定色谱柱类型、流动相组成
pKa----确定流动相的pH值
化学结构、特征官能团、Etc.
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● 方法开发前要确定的基本问题
2、混合分析物的主要差异
疏水性差异----用疏水性选择性强的色谱柱
极性差异----用具有极性选择性的色谱柱
芳香性差异----用芳香选择性色谱柱
混合差异----用多种选择型色谱柱
分子量差异----GPC、GFC
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● 方法开发前要确定的基本问题
3、选用何种分析方法
HPLC-UV
HPLC-IR
HPLC-MS
HPLC-ELSD
Etc.
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● 色谱柱的选择
1、色谱柱的基本技术参数
固定相----决定选择性
硅胶纯度(金属含量)----影响峰形
粒径----影响柱效、柱压
碳载量----影响保留时间
孔径----孔径大,比表面积小
比表面积----影响载样量
pH范围-----决定灵活性
封尾基团----影响峰形、保留
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硅胶纯度(金属含量)
Columns: A型硅胶( = 旧型号)
B型硅胶(Gemini™ 5µm C18)
Mobile phase: 10mM 甲酸铵 pH : 乙腈: 甲醇( 35:15:50 )
Flow rate: mL/min
Components: 123
2. Rhodamine 6G
3. Rhodamine B Base
玫瑰精, 若丹明(一种红色荧光染料)
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色谱图
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A型硅胶C18
化合物被吸收
B型硅胶
(Gemini C18)
峰形、峰高、分离正常
金属的影响(1)
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