文档介绍：中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(5): 531-537
人外周血淋巴细胞体外诱导培养前后细胞表型与
细胞毒活性相关性研究
刘运洪孟明耀解燕华刘莹魏传钰侯宗柳*
(昆明医学院附属延安医院中心实验室, 昆明 650051)
摘要为了分析体外细胞因子诱导培养CIK细胞过程中细胞表型的变化与其杀瘤活性的
相关性及为临床过继免疫治疗提供实验依据, 本研究采用体外诱导方法扩增培养正常人外周血
淋巴细胞及单个核细胞, 应用流式细胞术测定培养前、培养第7天和第14天的CD3+等15种不同
表型细胞百分率的变化, 用CCK-8试剂检测第7天和第14天的细胞毒活性。结果显示, 扩增培养
后T细胞活化表型的表达和细胞毒活性在第7天最强, 与其细胞表型CD3+CD25+、CD3+CD28+、
CD3+CD25+CD28+、CD3+CD4+呈正相关(P<), 与CD3+CD45RA+CD45RO+呈负相关(P<)。
本研究表明测定培养细胞活化相关表型可以间接监测其杀瘤能力, 为临床CIK细胞过继免疫治疗
的应用提供实验依据。
关键词体外诱导; 细胞表型; 细胞毒活性; CIK
近年来, 国内外应用抗人CD3抗体、IL-2等主的细胞计数试剂盒Cell Counting Kit-K-8)购自
要刺激因子扩增了多种淋巴细胞, 用于过继免疫治日本DOJINDO(同仁化学)公司。
疗, 其中CIK是体外由外周血淋巴细胞在多种细胞淋巴细胞培养用外周血淋巴细胞来自20
因子(IFN-γ、CD3单克隆抗体、IL-2、IL-1)诱导下名健康志愿者, 年龄结构25~36岁18名, 50~55岁2名,
大量增殖成为的肿瘤杀伤细胞, 由Hontscha等[1]首均男女各半。
次报道, 其同时表达CD3、CD56两种细胞表型, 是肿瘤细胞肿瘤细胞株SPC-A-1和BGC-
一种新型、高效非MHC限制的免疫活性细胞, 临床 823购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研
试验结果显示具有较好的应用前景。但是对于体外究所。
扩增培养后细胞杀瘤机制比如表型与细胞毒活性的仪器流式细胞仪为美国BD公司BD
相关性研究却并不详细和全面。本研究在应用流式 CaliburTMFACS, 所采用分析软件有CellQuest、FAC-
细胞术测定扩增前后15种细胞表型变化的基础上, SCOMP。酶标比色仪为美国BIO-RAD Model-680。
用CCK-8试剂检测其杀瘤活性, 分析其相关性, 为临方法
床过继免疫治疗提供实验依据。外周血淋巴细胞体外扩增采用孟明耀等[2]
所用的改良RP-MI1640培养基外周血淋巴细胞体外
1 材料与方法扩增培养方法。
材料淋巴细胞表型的检测培养前(0天)取
试剂 RPMI1640购自美国GIBCO公司; 鼠 EDTA-Na2抗凝外周血25 μl, 分别加入荧光标记抗
抗人CD3单克隆抗体购自北京市晶美基因谷科技有体10 μl, 振荡混匀后25 ℃避光20 min, 加入1 ml溶血
限公司; IL-2