有机酸检测方法.doc

文档介绍：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、苯乙酸、阿魏酸甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、仪器与设备 waters2695AllianceSeparationsModule高效液相色谱仪;waters2996PhatadiodeArray二极管阵列检测器;Heraeus离心机;HORIBApH计。色谱分析(1)混标配置。分别准确称取适量上述10种有机酸并用超纯水溶解或稀释,,转移至50mL容量瓶中,定容,配制浓度为100mg/L的储备液,保存于4℃冰箱中。(2)标准曲线绘制。有机酸标准液的配置:根据紫外吸收灵敏度,将草酸、酒石酸、苹果酸、甲酸、丙二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、∶∶5∶5∶5∶∶5∶5∶5∶5的比例配制混标,逐级稀释,配制成A、B、C、D、E五个浓度级别的标准溶液,以绘制标准曲线。;,5,5,5,,5,5,5,5(μg/mL);B、C、D分别为上一个级别浓度的5倍稀释,E级为D级的2倍稀释。并将这10中有机酸编号为:OA01-OA10。(3)色谱条件。×250mm,5um,pH范围:2~10,流动相:%H3PO4的去离子水和乙腈(V/V)98∶2;检测器波长:210nm;流速:1mL/min;进样量:20u;l柱温:35℃;(4)流动相配置。取1mLH3PO4用超纯水稀释至1000mL,,超声脱气后备用。乙腈(色谱纯)超声脱气备用。阿魏酸阿魏酸的测定:,加入乙酸乙酯约45ml,超声处理30min并静置过夜,加乙酸乙酯到刻度,摇匀,过滤,吸取滤液25ml水浴蒸干,残渣加甲酸溶解并移入10ml容量瓶,定容之后用荧光分析仪测定。实验仪器KQ-360DE型数控超声波清洗器、玻璃仪器烘干器、TDI5-WS多管架自动离心机、电子天平、RF-540荧光分光光度计。实验药品乙醇、乙酸乙酯、1%碳酸氢钠、2%碳酸钠等试剂均为分析纯,水为亚沸高纯去离子水,阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0773-9910)。,置100mL容量瓶中,加2%碳酸钠溶解,室温下对不同浓度的阿魏酸对照溶液在200-600nm波长范围内进行激发波长扫描,阿魏酸的最大激发波长(λex)为343nm,固定该激发波长,扫描得发射谱图,得到其发射波长(λem)为463nm,且随着阿魏酸浓度的增加其波长没有偏移,荧光强度随着阿魏酸浓度的增加而增大,因此,选择该最大激发波长和最大发射波长(即λex/λem为343nm/463nm)作为后继测定的工作条件。标准曲线精密量取适量的阿魏酸对照品溶液,、、、、、3μg/mL标准溶液,选定激发波长和发射波长条件下,测定其荧光强度,以阿魏酸对照品溶液的浓度为横标轴(x),以荧光强度为纵坐标轴(y),得回归方程为y=+4·8058,r=,-3μg/mL范围内线性关系良好。,置具塞三角瓶中,加1