文档介绍：提高分离度R,需要分别增大n,α,k值n:柱效,易受柱长、填料粒径的影响α:选择性,易受流动相和固定相影响;k:保留因子,受固定相和流动相的影响色谱分离基本方程HPLC柱的“色品”表达式柱效(n)对分离度(R)的影响以上两张谱图k,α值完全相同,仅仅由于柱效高低不同使得它们具有不同的分离度。“高富帅”分离选择性(α)对分离度(R)的影响α===(k)对分离度(R)的影响容量因子大于10,k/(k+1)的改变不大,而分析时间将大大延长。因此,k的最佳范围是1<k<20。改变容量因子的方法有:减小柱死体积改变柱温改变流动相的配比梯度洗脱αk'N如何控制分辨率?影响色谱柱性能的因素6色谱柱与色谱填料的特性1、柱填料硅胶纯度粒径(及粒径分布)比表面积孔径2、色谱柱的构型色谱柱直径色谱柱长度3、固定相键合类型残余硅羟基的影响反相键合相的保留行为键合硅胶的稳定性物理因素化学因素AggregationPolymerization堆砌法硅胶Innoval、UHP、Bonshell优点:高机械强度,耐污染共聚法硅胶Venusil、Durashell优点:分离效果佳硅胶制作工艺硅胶基质反相色谱分离三要素固定相流动相反相作用氢键作用弱离子交换作用反相作用氢键作用弱离子交换作用-R-OH-O-H+甲醇/乙***水缓冲盐溶液目标物A、B疏水部分(链烃和芳香烃)羟基、氨基离子化基团109876543210pHk’2486弱碱弱酸pH=pKORCOHORCOpH对分离的重要影响调节ph值对样品的分离非常有效色谱柱固定相稳定性400-6068-099