文档介绍：宫颈癌细胞FHIT基因启动子CpG岛***化状态分析【摘要】FHIT基因是一种与凋亡有关的肿瘤抑制基因,广泛存在于各种细胞凋亡系统中,在多种肿瘤及细胞系中失活,其启动子部位CpG岛***化是FHIT基因失活的主要机制之一。本研究应用***化特异性PCR(MethylationspecificPCR,MSP)对不同宫颈鳞癌细胞系FHIT基因启动子CpG岛***化状态进行检测,在分子水平上了解FHIT异常***化与宫颈癌的相关性,为宫颈癌去***化治疗提供依据。【关键词】宫颈癌;FHIT基因;***化PCR DetectionofMethylationoftheFHITPromoter'CpGinHumanCervicalCancerCellLinesAbstract:The'CpGislandmethylationofFHITgenehasbeendetectedinmanycarcinomas,anditmaybearosesinactivationonFHITlittledetailsonmethylationstatusof'CpGislandofFHITgeneincervicalcancercellwerereported,sothisstudywasdesignedtoexploremethylationstatusof':CervicalCancer;riad(FHIT)gene;Methylationspecificpolymerasechainreaction(MSP)国内外有关宫颈癌与FHIT基因启动子区***化的研究报道不多,结论尚不一致。Herman[1]等1996年建立的异常***化检测方法(MSP)具有灵敏度高、特异性好、操作简便的特点。本研究拟应用MSP技术分析人宫颈癌细胞株FHIT基因5'端CpG岛***化水平,旨在揭示FHIT基因***化对人宫颈癌发生的影响,为寻找宫颈癌诊断和治疗的新方法提供理论和实验依据。、C41、Hela、RJC1、CS1213以及C33A细胞株为西安交通大学第一附属医院临床分子生物学中心保存。主要试剂RPMIMedium1640为美国GIBCO公司产品;热启动Taq酶、HaeⅢdigestDNAMarker购于日本Takara公司;亚硫酸氢钠、氢鲲购于美国Sigma公司。FHIT***化扩增引物序列:F5_TTGGGGCGCGGGTTTGGGTTTTTACGC3;R_ACTA3,扩增产物长度为74bp;非***化扩增引物序列扩增产物长度为F_TTGGGGTGTGGGTTTGGGTTTTTATG3;5_ACTA3;两组引物由上海生工生物公司合成。方法提取样品常规细胞复苏、传代、收集细胞,-70℃保存。QiagenDNeasyTissuekit提取细胞基因组的DNA。取μlDNA样品加入9μlTE缓冲液稀释,经核酸蛋白分析仪测定260nm和280nm处的吸光度,若比值在