文档介绍：摇圆园员员员园猿圆员怨摇摇韵糟贼援圆园员员灾燥造援猿圆晕燥援员怨圆缘园缘
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同型半胱氨酸转***酶的制备及纯化
杨一芬,王天菊,卿之驹△
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中南大学湘雅二医院检验科(长沙)
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【摘要】目的建立同型半胱氨酸转***酶( )的制备及纯化方法,为临床应用提供基础。方法采
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用大肠埃希菌表达体系获得蛋白,然后应用、、
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层析柱纯化,并行验证。分别用商品化同型半胱氨酸试剂盒和提纯的测定份血清的
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同型半胱氨酸浓度,初步判断纯化的活性。结果( ) 在大肠埃希菌体系中成功表达,并经
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、、层析柱纯化后在上显示为单一条带,分子量为
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。( )采用纯化的检测例标本,与商品化试剂盒检测结果差异无统计学意义[( )
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增泽( ) ,孕],且结果呈高度正相关(则,孕)。结论建立的的
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制备及纯化方法切实可行,有望应用于同型半胱氨酸浓度的检测。
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【关键词】同型半胱氨酸转***酶;同型半胱氨酸;层析法
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同型半胱氨酸( , )即氨基电泳仪(美国),鼎国
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[ ]
巯基丁酸,结构式为圆圆( 圆) 圆,在水平脱色摇床(北京鼎国生物技术有限责任公司),红
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年由等在研究有关硫的代谢时首次外快捷加热过胶机(杭州五环办公设备技术有限公
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合成。研究普遍认为,高同型半胱氨酸血症是心血管司),匀浆仪(上海浦江分析仪器厂), 转印仪
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疾病的独立危险因素。临床上测定采用循环酶( )。
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法,同型半胱氨酸转***酶( 实验方法
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, )是测定的关键酶之一,因其特有的高灵的制备将含有外源性基因的
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敏度和特异性而被广泛地应用到临床心血管疾病和相大肠埃希菌接种至血平板, 培养过夜后转接种到
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关疾病的诊断中。自年等首次克隆出人含氨苄青霉素的培养液中, 在摇床上培养至对
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类的[ ],目前国际上已有商品化的出售, 数中期,加入诱导之后离心弃上清留沉淀。
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其中酶的组分往往来自于多步的分离纯化。而我国目用缓冲液混匀沉淀后用电动搅拌机以破
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前鲜见相关报道。因此制备活力高、稳定性好、专一性坏细菌,冰浴匀浆,