文档介绍：多聚酶链式反应扩增DNA片断
一个核苷酸上的磷酸基团上的“-OH”和另一个核苷酸分子的第三位碳原子上的羟基之间失去一分子水,形成磷酸二脂键,即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二脂键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二脂键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“-OH”末端称为3’端,而磷酸基团的末端称为5’端
4、多脱氧核苷酸链得形成
脱氧核苷酸结构式
O
O
P
O
HO
碱基
O
OH
O
O
P
O
HO
OH
碱基
5’
3’
3’
5’
碱基
脱氧核糖
磷酸基团
碱基
脱氧核糖
碱基
脱氧核糖
5’
3’
多脱氧核苷酸链结构简图
② RNA引物的合成
以单股DNA为模板,在引物酶的作用下合成小段的RNA引物
③ DNA的生成
以单股的DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下合成DNA。
边解旋边复制(过程)
复制特点
半保留复制(结果)
遵循原则
碱基互补配对原则
(四) PCR(多聚酶链式反应)
1、 DNA聚合酶特性
不能从头合成DNA,只能从DNA的3′端开始延伸DNA链,因此, DNA复制需要引物
2、 DNA聚合酶作用过程
当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后, DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链, DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸
3、 PCR原理
①在80-100°C的温度范围内, DNA的双螺旋结构将解体,双链分开,这个过程称为变性
②当温度缓慢降低后,两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链
③ PCR利用了DNA的热变性原理,通过控制温度来控制双链的解聚与结合,现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器