文档介绍：pcr基因扩增实验报告实验三PCR扩增姓名:李宗翰专业:环境工程学号:同组人姓名:刘雪飞一、实验目的复****PCR扩增的原理,熟悉PCR的操作流程。二、实验原理 PCR,即聚合酶链式反应,是一项在体外、短时间内大量扩增特定的DN***段的分子生物学技术。以单链DNA为模板、4种dNTP为底物,在模板3’末端有引物存在的情况下,用酶进行互补链的延伸。多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。 PCR包括三个过程: 、变性:目的双链DN***段在94℃下解链; 、退火:两种寡核苷酸引物在适当温度(50~60℃)下与模板上的目的序列通过氢键配对; 、延伸:DNA模板—引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2-3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。三、实验仪器及材料 PCR扩增仪,微量移液器,Tip头,薄壁管,离心管,TaqDNA聚合酶,dNTP,buffer,引物,16S全长DNA样本。四、实验步骤 1、用微量移液器分别取194μLddH2O、25μLBuffe、10μLdNTP、5μL341FGC引物、5μL534r引物及μLTaqDNA聚合酶于离心管中,混合均匀后分装到9个薄壁管中,每支管加入24μL混合液。 2、向第1~8支薄壁管分别加入1μL样品模板,第9支管加入1μL无菌水做阴性对照。在薄壁管的盖子上写上组号及样品编号。 3、将9支薄壁管放入PCR扩增仪中,设置好扩增条件:94℃3min;94℃30s;55℃30s;72℃30s;72℃5min;15℃。循环次数30~40。设置好后启动扩增仪,开始扩增。 4、将扩增的好的样品按下述步骤进行电泳实验: 、取琼脂糖和20ml×TAE于锥形瓶中,放置微波炉中加热2min左右,至混合液透明,取出室温下冷却。将混合液倒入FR-180E制胶器的槽中,插入孔刷,注意不要有气泡。冷却一段时间,等胶凝固。、取10μ(转载于:写论文网:pcr基因扩增实验报告)LLoadingBuffer染液,在铺平的塑料手套上均匀分成9份,再取4μLPCR产物与染液混匀。将10μL移液器调至6-7μL,依次吸取上述混合液滴,分别加入到1-9号胶孔中,第10号胶孔中加入4μL的DLXXTMDNAMaeker。、将胶整个放入装满×TAE的电泳槽中,通100V电压。、电泳半小时左右,可明显看出染液移动。将胶至于分析仪器内,在紫外灯照射下,得到电泳图并拍照。五、实验结果与讨论 1、此次实验结果是什么?所得到的实验结果该如何解释?答:此次实验结果如下图所示。图中,1-8号为待测样品,9号为阴性对照,10号为DNAMarker。从电泳结果可以看出,3-6号样品对应Marker的250bp左右处有明显的亮带,说明3-6号样品的PCR扩张很好。2号样品在250bp处条带较微弱,说明扩增效果不是很好。而1、7、8号样品,在250bp左右基本无亮带,说明扩增实验出错,可能是因为模板没取到或者移液器枪头在加样时未深入液面下加入而引起的。9号为阴性对照,在250bp处无亮带,说明效果良好,实验过程中无环境污染。