文档介绍：检验医学年月第卷第期,,.
文章编号:—中图分类号: 文献标识码:
人结肠癌细胞中一基因单核苷酸多态性
对启动转录活性的影响
顾星, 季鑫, 王爱华, 高春芳
第二军医大学东方肝胆外科医院实验诊断科,上海
摘要:目的探讨在人结肠癌细胞中转化生长因子一基因上游启动子一位点多态性对
其转录活性的影响。方法以特定一基因型患者为模板,用聚合酶链反应扩增得到对长
~含有一变异的一上游基因片段,并将其与不含启动子的一
报告基因载体重组,.。用脂质体转染法将种重组体分别转
染至人结肠癌细胞和细胞中,酶联免疫吸附试验测定转染细胞的报告基因活性。
结果在和细胞中,
.细胞的活性.。结论一位点等位基因可明显增强—基因上游调控序列的转录
活性。
关键词:单核苷酸多态性;转化生长因子;启动子;转录活性;结肠癌

,,,.
,,,
,
: 一
——. 一一十
.—一
.一一—一,
..
.
—. ,
..
.、. 一一
.
: —; —; ;
;
结肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤,其发病一升高与结肠癌进展、转移都显著相关。
率有逐年上升的趋势。转化生长因子一基因序列上的
—,是一种与结肠癌相关性的研究也已有报道,
多功能多肽,作为—细胞因子超家族的成员但结果并不一致。本研究在多年研究一转
调节多种靶基因的表达,在肠上皮细胞的分化、移录活性及调控区的基础上,探寻基
行、增殖及凋亡中发挥着重要作用。血清中因上游一多态性与结肠癌发生、发展的相
基金项目:国家自然科学基金
作者简介:顾星,女,年生,博士,助理研究员,主要从事消化道疾病相关的基础研究。
通讯作者:高春芳,联系电话:。
榆验医学年月第卷第期,, .
关性,从功能上探讨该位点多态性在结肠癌细胞中康生物技术公司鉴定正确后,大量扩增阳性克
对调控转录作用的影响,旨在明确结肠癌的发生、隆、抽提、纯化质粒重组体,紫外分光光度计测得
发展是否与该位点调控转录活性有关。率、纯度。
. 转染转染采用脂质体转染试剂,
材料和方法
操作按照试剂说明进行。具体方法如下:结肠癌
一
、材料和试剂和细胞以/孔接种于孑培养
人结肠癌细胞和细胞购自中科板,待细胞% 融合生长,换无血清培养基。按
院细胞库,由本实验室传代培养。培养基分别为与脂质体转染试剂为:.的比例将重组
%胎牛血清,
培养基,美国,.%胰蛋白酶消化传代孑中,继续培养。同时另转染一半乳糖苷酶表达
博光科技; 相对分子质量标记质粒—作为内对照及含的表
,日本;限制性内切酶、。后换含%
,日本; 连接酶,美胎牛血清培养基继续培养。上述实验采用
国;质粒抽提纯化试剂盒复孔,并重复次。
,德国;、活性
生物公司; 聚合酶—,日终止培养的细胞用预冷的磷酸盐缓冲液洗
本;脂质体转染试剂次,以裂解缓冲液裂解细胞后,取细胞裂解液进
,美国;载体质粒一行蛋白定量、一酶联免疫吸附试验定
,