文档介绍：荧光定量PCR实验原理及数据分析SangonBiotech(Shanghai)Co.,荧光定量PCR的原理荧光定量PCR的标记方法荧光定量PCR解析方法荧光定量实验流程及注意事项生工荧光定量产品选择指南量PCR原理--定义实时定量PCR技术:利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析与常规PCR技术比较:对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析,无法对起始模板准确定量,无法对扩增反应实时检测量PCR原理--常用名词概念扩增曲线荧光阈值Ct值量PCR原理--扩增曲线平台期荧光基团Lg-linerphaseRn(荧光强度)Baseline荧光检测元件Cycle(循环数)量PCR原理--荧光阈值平台期前15个循环信号作为荧光本底信号(baseline)荧光阈值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的Lg-linerphase倍10Threshold(荧光强度)手动设置大于荧光背景值和阴:Rn性对照的荧光最高值;进入指数期的最初阶段真正的信号:荧光信号超过阈值BaselineCycle(循环数)量PCR原理--Ct值Ct值的定义:PCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的阈值Ctvalue时所经过的扩增循环次数Rn(荧光强度)Cycle(循环数)量PCR原理--Ct值的重现性纵轴:荧光信号量横轴:PCR反映循环数Ct值的特点:•相同模板进行96次扩增,终点处产物量不恒定;•Ct值极具重现性量PCR原理--Ct值定量的数学原理n理想的PCR反应Xn=X0*2n:扩增循环数X0:起始模板数量Xn:第n次循环后扩增产物数量量PCR原理--Ct值定量的数学原理n非理想的PCR反应Xn=X0*(1+En)n:扩增循环数En:扩增效率X0:起始模板数量Xn:第n次循环后扩增产物数量