文档介绍：母液的微量元素配制实验报告实验二培养基母液的配制及保存一、目的要求了解并掌握植物组织培养中MS培养基母液、生长调节剂母液配制与保存的基本知识及操作规范,能根据配方准确计算各种药品的称取量。二、基本原理在配制培养基之前,为了使用方便、简化操作、用量准确,减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差,常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、有机物、铁盐、激素等分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液,置于冰箱内保存。当配制培养基时,按预先计算好的量分别吸取各种母液即可。本实训以MS培养基为例,学****培养基母液的配制方法。三、、用具电子天平(感量和)、药匙、玻璃棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗瓶、标签纸、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量杯、量筒、移液管、移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。 95%乙醇、1mol/LNaOH、1mol/LHClMS培养基各成分试剂植物生长调节剂:2,4-D、6-BA、IAA、NAA等洗涤剂、蒸馏水四、方法步骤 ,将各种化合物称量扩大10倍,用电子天平称取,并分别用少量蒸馏水溶解,如溶解速度慢,可稍加热。完全溶解后,按表4-1顺序依次混合已溶解的化合物溶液,并搅拌,以免产生沉淀,注意最后加入***化钙溶液,混匀,用量筒定容到500ml,倒入试剂瓶中并贴好标签。保存于4℃冰箱待用。表4-1MS培养基大量元素母液的配制剂量 ,将微量元素各种化合物扩大100倍,用万分之一的电子天平分别准确称取,用少量蒸馏水溶解,也可以混合溶解,混合后定容到500mL。将配制好的母液倒入试剂瓶中,并贴好标签,保存于4℃冰箱中。 ·7H2O和Na2-EDTA的螯合物,必须单独配制。配制时,按照扩大100倍的用量,分别称取FeSO4·7H2O和Na2-EDTA,分别溶解后,将Na2-EDTA溶液缓缓倒入FeSO4溶液中(需加热溶解),搅拌均匀使其充分螯合,用蒸馏水定容到500mL后贮放于棕色玻璃瓶中,贴好标签,保存于4℃冰箱中。表4-3MS培养基铁盐母液的配制剂量 -4中各成分浓度扩大100倍后的用量,用感量电子天平分别称量各有机物。分别溶解定容后装入试剂瓶中,也可以混合溶解定容,装入同一试剂瓶中,写好标签,放入冰箱中保存。一般有机物都溶于水,但叶酸先用少量稀氨水或1mol/LNaOH溶液溶解;VH先用1mol/LNaOH溶液溶解;VA、VD3、VB12应先用95%乙醇溶解,然后再用蒸馏水定容。表4-4MS培养基有机物母液的配制剂量扩大倍数、计算实际称取量。 ,浓度根据培养基配方的需要量灵活确定,一般是~2mg/ml,根据需要确定配制的浓度。称量激素要用感量万分之一天平。配制激素母液时应注意,各激素的溶剂不同,具体见表4-5。表4-5常用植物激素及生长调节物质的溶剂中文名 2,4-二***苯氧乙酸吲哚乙酸吲哚丁酸α-萘乙酸6-苄基氨基腺嘌呤腺嘌呤激动素玉米素赤霉素脱落酸缩写2,4-D IAAIBAα-NAA6-BAAdeKTZTGAABA 溶剂NaOH/乙醇NaOH/乙醇NaOH/乙醇NaOH/乙醇NaOH/HCl H2OHCl/NaOHNaOH乙醇NaOH 注:称取10mgNAA溶解后定容至100ml,即得到/mlNAA贮备液。称取100mg6-BA溶解后定容至100ml,即得到1mg/ml6-BA贮备液。 : 培养基各试剂应使用分析纯,用蒸馏水溶解及定容。在称量时应防止药品间的污染,药匙、称量纸不能混用,每种试剂使用一把药匙,多出的试剂原则上不能再倒回原试剂瓶。使用电子天平时注意不要把药品撒到称盘上,用完以后,用洗耳球将天平内的脏物清理干净。母液配制好后,贴上标签,标明母液名称、试剂浓度或扩大倍数、配制日期,并存放在4℃冰箱中。使用前,要进行检查,若发现试剂中有絮状沉淀、或长菌、或铁盐母液的颜色变为棕褐色,都不应再使用。五、结果与分析 1为什么要配制培养基母液? 2在配制培养基时,配制1升MS基本培养基应吸取本实验中所配制的四种混合母液各多少毫升? 3仔细观察在配制母液过程中的现象与遇到的问题,如是否产生浑浊或沉淀,并分析出现混浊的原因。培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质,配制成较浓的母液,贮存在冰箱中备用,以后配制培养基时根据用量量取。由于培养基成分较多,如果每配制一次即进行多次称量,不仅会造成较大的误差,而且会增加工作量,因而配制母液可使培养基配制方便准确。配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍,倍数不宜过高。MS培养基母液及培养基配方法参考表2。大量成分母液经常将CaC