分子克隆.doc

文档介绍：15普通PCR与测序PCR的区别?16在分子杂交中,加入甲酰胺试剂的作用?17简述在分子杂交中,预杂交的作用?18简述探针的标记方法19实时定量PCR技术和普通PCR的区别常规PCR技术:对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准确定量,无法对扩增反应实时检测。实时定量PCR技术:利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。区别::荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光。:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳。:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的。20实时荧光定量PCR时,什么情况需要做溶解曲线,溶解曲线的作用?熔解曲线的设置是在整个PCR完成后进行,从60升到95,每升高1仪器会自动收集荧光信号,得到的熔解曲线是逐渐下降的过程,且在Tm下降最快,为分析方便,我们将温度与荧光强度的变化求导,得到单峰的熔解曲线,这样我们就可以证明引物的特异性良好,实验结果不受非特异性扩增和引物二聚体的干扰。21实时荧光定量PCR中,TaqMan法的优缺点优点:------------:,