文档介绍：高效液相色谱法
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高效液相色谱法(HPLC)是60年代末以经典液相色谱法为基础,引入了气相色谱的理论与实验方法,流动相用高压泵输送,采用高效固定相和在线检测等手段发展而成的分离分析方法。
与气相色谱法相比具有:适用范围广,样品预处理简单,分离效率高,流动相选择范围广,检测方法多为非破坏性的,流出组分可回收等优点。
第一节概述
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HPLC
液-固吸附
液-液分配
正相色谱
反相色谱
一般反相色谱
离子对色谱
离子抑制色谱
离子交换色谱
一般离子交换色谱
离子色谱
氨基酸分析
空间排斥色谱
凝胶渗透色谱
凝胶过滤色谱
假相色谱
胶束色谱
环糊精色谱
亲合色谱,手性色谱,毛细管电泳
键合相色谱
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正相色谱(normal phase)
流动相极性小于固定相极性的分配色谱法称为正相分配色谱。常用的分析柱有:
氨基柱、氰基柱、硅胶柱。
常用流动相为极性小的有机溶剂。
反相色谱(reversed phase)
流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相分配色谱法。常用的分析柱有:ODS( C18), C8, C2。
常用流动相为甲醇-水,乙腈-水。
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离子抑制色谱(ion suppression chromatography)——调节流动相的pH值,抑制组分的解离,增加组分在固定相中的溶解度,改善峰形,以达到分离有机弱酸和弱碱的目的。
离子对色谱(ion pair chromatography)——将反离子加入流动相中,与呈解离状态的被测物作用,生成脂溶性的中性离子对络合物,从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度,改善分离效果,达到分离目的。
常用反离子有:季铵盐——用于酸类
烷基磺酸盐——用于碱类
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离子色谱法( ion chromatography )
离子色谱是由经典的离子交换色谱发展起来的一种液相色谱技术,利用物质在离子交换柱上迁移的差异而达到分离,用于亲水性阴阳离子的测定。根据是否采用抑制柱,可分为抑制型离子色谱和非抑制型离子色谱。
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空间排斥色谱(steric exclusion )
也称凝胶色谱,依据被分离组分分子尺寸与凝胶空径大小之间的相对关系而分离,类似于分子筛作用。在一定分子线团尺寸内,分子越大,保留时间越短。
凝胶渗透——以有机溶剂为流动相
凝胶过滤——以水溶液为流动相
对于相同化学组成的高分子化合物,其分子尺寸大小与分子量成正比,因此凝胶色谱可以研究高分子化合物的分子量分布。
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胶束色谱(micellar chromatography)
表面活性剂在水中超过某一浓度(临界浓度)时,多余的表面活性剂不再溶解,聚集而成胶束(胶粒)。
以胶束分散体系为流动相的色谱法称为胶束色谱法。它的流动相为胶束多相分散体系,不是真溶液;流动相中不含有机溶剂。
因胶束色谱法的流动相是多相分散体系,在整个色谱体系中又增加了一相,故也被称为假相色谱(pseudo phase chromatography)。
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手性色谱(chiral chromatography)
用于分离手性药物对映体的一种有效技术,可分为直接法和间接法两类:
直接法
手性固定相法(chiral stationary phase;CSP)
手性流动相法(chiral mobile phase additive;CMPA)
间接法—手性试剂衍生化法 chiral derivatization reagent,CDR)
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第二节高效液相色谱仪
色谱柱
进样阀
流
动
相
检测器
高压泵
脱气装置
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