文档介绍：102
中国烟草科学 Chinese o Science
2012-04,33(2)
烟草突变体筛选与鉴定方法篇:
2. 烟草抗主要病虫害突变体的筛选与鉴定
申莉莉
(中国农业科学院烟草研究所,青岛 266101)
参照烟草品种抗病性鉴定标准 GB/T 23224—2008,烟草基因组计划重大专项“烟草突变体创制、筛选
与分析”建立了烟草抗病毒病、青枯病、黑胫病、赤星病、烟蚜的高通量筛选方法,将全面开展烟草抗主
要病虫害突变体的大量筛选与鉴定工作。
1 抗主要病虫害突变体的高通量筛选
烟草品种抗病虫鉴定多采用温室苗期人工接种鉴定,在品种推广前再经大田成株期鉴定。面对庞大的
突变群体,选择一种快速、准确的筛选方法是获得有益抗性突变体的核心。
病毒病
烟草病毒病抗性筛选主要采用田间病圃系统调查和温室苗期接种两种方法。通过对常规汁液摩擦接
种、衣刷快速摩擦接种、喷枪接种和剪叶接种以及逐株调查病情、目测病情、ELISA、检测试纸条和 RT-PCR
等病毒检测方法比较发现,刷接目测病情法省时省力且能准确反应品种抗性。即用塑料衣刷蘸取病毒汁液
轻轻摩擦叶片接种,根据每批次抗感品种的病情划分病害严重度,目测每个突变材料(盘)病情。
青枯病
烟草青枯病抗性筛选有田间病圃筛选和室内苗期接种筛选。苗期筛选接种方法主要有伤根灌菌法、菌
液浸根法、茎部穿刺法、叶片注射法。烟草青枯病菌是从根部伤口侵入,引起微管束变褐,植株萎蔫,为
典型的微管束病害。经剪叶接种和茎枝菌液浸泡接种研究表明,茎枝菌液浸泡法发病快,幼苗抗病性与田
间抗性一致,易操作。即用手术刀垂直切取带有 3~4 片展叶的主茎,标记、浸于盛有青枯病菌菌液的容
器内 5 d,逐茎调查病情。根据抗感品种发病期和病情,划分突变材料病害严重度。
黑胫病
烟草黑胫病抗病性筛选有田间病圃筛选、室内接种筛选和离体叶片接种筛选 3 种方法;苗期筛选又分
为根接种和茎接种,根接种的接种体有孢子悬浮液和菌谷两种。用烟草黑胫病菌粗毒素浸种,经发芽率、
根冠细胞、叶片和电解质渗透等测定法比较发现,经粗毒素浸种,种子发芽率与抗病性呈正相关,且与大
田抗性表现一致。试验占空间少,周期短(15 d)。即用无菌毒素液浸泡种子 4~8 h,选取饱满的种子置于
无菌的水琼脂培养皿平板上保湿培养,于 25 ℃培养箱中促其萌发,测定发芽率。
赤星病
烟草赤星病抗性筛选有大田筛选、温室筛选、离体叶片筛选和毒素筛选。根据毒素作用部位的不同,
又分为离体叶片法、幼苗浸根法、种子根处理法等。而离体叶片法又分为悬滴法、喷雾法和针刺法[1]。烟
草不同品种对毒素的敏感程度与对病原菌的敏感程度密切相关,经不同抗感品种幼苗用赤星病菌毒素浸根
2012 年第 33 卷
中国烟草科学
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研究发现,根长与抗病性呈正相关,与田间成株期抗性基本一致。即将每个突变材料 2~3 真叶期幼苗 10~
15 株放入盛有赤星病菌无菌粗毒素稀释液的容器中浸根,25 ℃培养 6 d,测量根长。
烟蚜
烟蚜抗性筛选有常规苗期筛选和大田成株期筛选,也可根据植株受害症状等感官特征判定抗性。不同
抗感品种苗期接蚜,通过蚜量比值法和模糊识别法研究显示,蚜