文档介绍：长沙医学院教案课程名称分子生物学授课题目(章节或主题)实验二细菌基因组DNA提取授课教师陈珂珂所属系(部)基础系所属教研室生物教研室职称助教授课时间年月日第周星期第节第二次课授课时数4学时授课班级临生物技术专业(本科√专科□)2010级1班教学课型理论课□实验课√见****课****题课□讨论课□其它□教材名称、作者、出版社及出版时间分子生物学及基因工程实验教程、刘箭、科学出版社、2012教学目的要求:掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法熟悉提取过程中得注意事项重点与难点:掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法教学方法(请打√选择):讲授法√讨论法□启发式□自学辅导法□练****法****题或操作)√读书指导法□PBL(以问题为中心的教学法)□其他□教学手段(请打√选择):板书√实物√标本√挂图□模型□投影□幻灯□录像□CAI(计算机辅助教学)□教学过程设计和教学内容:(1),它是染色体外能稳定遗传的因子,具复制和控制的结构,是寄生性自主复制子。将细菌液体培养物用酚/***仿混合,同时完成裂解和蛋白质变性的两个过程,经离心去除蛋白质,上清液用异丙醇沉淀。、材料、试剂(一)仪器高速离心机、漩涡振荡器、恒温摇床、电子天平、微波炉、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、微量移液器;(二)材料细菌液体培养物、饱和酚、***仿、异戊醇、无水乙醇、琼脂糖、三羟***氨基甲烷(Tris)、硼酸、乙二***四乙酸(EDTA)、溴酚蓝、蔗糖、溴化乙锭(EB)、称量纸、容量瓶、一次性手套、取液器、三角瓶、量筒(100mL)、Tip头(10uL)、胶带;提示栏讲述时间分配(三),应在950mL去离子水中加入:胰蛋白胨(bacto-typtone)10g酵母提取物(bacto-yeastextract)5gNaCl10g摇动容器至溶质完全溶解,用NaOH调节至Ph=,加入去离子水至总体积为1L,121°C,湿热灭菌20min。(一)(每组两管)4℃12000rpm离心30sec,弃去上清,倒置试管于吸水纸上吸干。µl裂解液,用移液枪枪头反复抽吸辅助裂解,37℃水浴30min。µl的5MNaCl溶液,颠倒试管,充分混匀后,13000rpm离心15min。用***的枪头(用剪刀剪去1ml枪头的尖端)小心取出上清液转倒两支新的EP管中。/***仿,充分混匀后,12000rpm离心3min,离心后的水层如混浊则说明仍含有蛋白质,则需将上清液转入新的试管,重复上述步骤直到水层透明,水层和酚层之间不再白色沉淀物为止(约2次)。,加等体积的