文档介绍：实验二多酚氧化酶米氏常数 (Km)的测定一、实验目的1、学习分光光度法测定的原理和方法2、了解诶并掌握米氏常数的意义和测定方法二、实验原理米氏方程:v=Vm[S]/(Km+[S])符号意义:v为反应初速度;Vm为最大反应速度;[S]为底物浓度;Km为米氏常数。1:以v对s作图:若v=Vm/2时,Km=[S],即米氏常数等于反应速度达到最大反应速度一半时所需底物的浓度。2:以1/v对1/[S]作图:将米氏方程倒数可得:1/v=(Km/Vm)1/[S]+1/Vm此方程为一次函数,斜率为Km/Vm,截距为1/Vm,若将直线延长与横轴相交,则该交点在数值上等于-1/Km二、具体操作步骤1:——然后用剪刀尽可能将其剪碎——然后放入研钵中;2:,分三次添加到研钵中进行研磨(3+4+3)——将研磨好的液体逐次倒入离心管中——然后放入冰冻离心机中离心10min,转速5000——然后将上清液倒入小烧杯中即为酶液;3:每小组取6(5)支试管——编号——按下表内容加样:(ml):加样完毕——振荡——放入30度恒温水浴中保温2min——取出冷却片刻——测量OD值(λ=420nm)——记录数据。5:作图,并完成课后作业。