文档介绍：实验四
食品中细菌总数及大肠菌群的检测
食品微生物学基础实验
普通微生物学实验
主讲:郑海涛
一、目的要求
1、掌握食品中微生物学基本指标的检测方法。了解食品质量与细菌和大肠菌群数量的重要关系
2、通过实验,初步掌握食品中污染的活细菌计数方法,以判别食品的卫生质量
1、菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
2、大肠菌群系指一群能发酵乳糖,产酸产气,需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成,即艾希氏菌属、枸橼酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,具有广泛的卫生学意义。
二、实验原理
一、待测样品: 奶粉还原液、豆腐等。
二、培养基 平板计数琼脂培养基、月桂基磺酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB), 225m1无菌生理盐水、 9m1无菌生理盐水、1mol/L氢氧化钠、1mol/L盐酸。
三、无菌培养皿、革兰氏染色液、移液器、枪头、培养箱、水浴锅、电子天平、电炉、玻璃珠(直径为5mm)、试管架、酒精灯、灭菌镊子、75%酒精棉球、玻璃蜡笔、不锈钢勺等。
三、实验材料
四、操作方法
一、细菌总数:
(1) 以无菌操作将检样25克(或25ml)放于装有225ml灭菌生理盐水和玻璃珠的三角瓶中,充分振荡制作成1:10的均匀稀释液,-,必要时用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸调节(固体食品需先用无菌均质器均质后再稀释)。
(2) 用移液器,吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内,振摇均匀,制成1:100的稀释液。
(3) 另取枪头,按上述操作进行10系列稀释成不同浓度的稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支无菌枪头。
(4) 根据对标本污染情况的估计,选择2-3个稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即吸取该稀释度的稀释液1ml于灭菌培养平皿内,每个稀释度作两个平皿。
(5) 稀释液吸入平皿后,将融化并冷却至45℃的平板计数琼脂培养基注入平皿约15ml,并转动平皿使其混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml灭菌生理盐水的灭菌平皿作空白对照。
(6) 待琼脂凝固后,翻转平板,置36+1℃恒温箱内培养482小时后取出,计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得每克样品所含菌落总数。
菌落总数的检验程序
检样
25g(或25ml)样品+225ml稀释液,均质
10倍系列稀释
选择2-3个样品匀液各取1ml,分别加入无菌培养皿内
每皿加入15-20ml培养基摇匀
36℃±1℃培养48±2h
计算菌落数,报告
梯度稀释
操作方法
二、大肠菌群检验:
取样品及稀释方法与菌落总数检验方法相同,做成1:10的均匀稀释液为检样,()各3管。
选择待测样品3个适宜稀释度接种于LST发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料LST发酵管;每一稀释度接种3管,置361℃温箱内,培养242小时,如所有发酵管都不产气,继续培养242小时,观察倒管内是否产气,如未产气可报告为大肠菌群阴性;如有产气者,则进行复发酵试验。
将所有产气的LST发酵管分别转接在BGLB肉汤管中,置361℃温箱内,培养48h 2 小时,然后取出,观察产气情况。产气者,计为大肠菌群阳性管
根据复发酵试验的阳性管数,查大肠菌群最可能数(MPN)检索表。得出每1m1(g)食品中存在的大肠菌群数的近似值。
检样25g或25ml+225ml稀释液,均质
10倍系列稀释,选三个适宜稀释度接种LST肉汤管
36℃±1℃培养48±2h
不产气
产气
接种BGLB肉汤
36℃±1℃培养48±2h
不产气
产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
查MPN表,报告
LST发酵管现象
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五、思考题