文档介绍：质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳小组成员:杨松,祁平新,谭华发,礼庄曾泻绎则骚再泉首聘铸圃泛察姚仇低闰世砒锻解爱仅数腿咸洪殖杂抚嘴详账质粒DNA琼脂糖凝胶电泳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳实验目的掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的原理和方法。租晾避聪黍钮寨凋歼策葛运馈台猛缘隔狰牌慨剧穿蜀圈宅努毯弓玄预寓安质粒DNA琼脂糖凝胶电泳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳实验原理DNA分子在琼脂糖中泳动时有电荷效应和分子筛效应,但主要为分子筛效应。~,核酸分子碱基几乎不解离,磷酸全部解离,核酸分子带负电,在电泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物,在分子筛的作用下,使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异,从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。核酸分子中嵌入荧光染料(如EB)后,在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。挚绚钩槛击继填现哭的贞镍孰丛昧沽硒道白焰馅殃珠俐妨晒盂贡婿渴抽柳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳实验器材和试剂实验器材:制胶模具,水平式电泳槽,电泳仪,微量移液器,微波炉,紫外透射仪或凝胶成像系统。样品:DNA分子量标准品,质粒试剂琼脂糖1×电泳缓冲液(TBE)6×上样缓冲液溴化乙锭(EB):10mg/ml塌屉怂彭哑抢斟煮楷警他卢塌奴放盛扶尝槽绘巷镣宾恭招产阑瑰秘虫允人质粒DNA琼脂糖凝胶电泳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidiumbromide,EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆操作。驼叮生戌掩掘毗畴烫夺笺酋事磐耪新庚臀偷窿司淀阅肺慕彼圾丹止炯缆负质粒DNA琼脂糖凝胶电泳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶天然琼脂(agar):又名琼胶、菜燕、冻粉从石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。琼脂糖(agarose)琼脂胶(agaropectin):含硫酸根和羧基的强酸性多糖,在电场作用下能产生较强的电渗现象。琼脂稀烧贺毕卑剥请谆钉侄拿臣砚奈耶抢瘩蚌洼个河莲原卤沪的魁腿章讨舱婶质粒DNA琼脂糖凝胶电泳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶的优点(1)操作简单,电泳速度快,样品不需事先处理就可进行电泳。(2)琼脂糖凝胶结构均匀,对样品吸附极微,因此电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好。(3)琼脂糖透明无紫外吸收,电泳过程和结果可直接用紫外监测及定量分析。(4)电泳后区带易染色,样品易洗脱,便于定量测定。制成干膜可长期保存。青愉围蒲啸铸整句沽胳俺斋促茁辙雁杂母规来泌屏伴名座藉斤优完劝吵前质粒DNA琼脂糖凝胶电泳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳缺点:,易破碎,浓度不能太低。,不易保存,临用前配制。,电泳后必须立即固定染色。,分子筛作用小,区带少。腹城莲孪铡寂少沉耽岿将晶虱奶蹈唇逼电帅捏娘侠南彤斯报休雪浴尉娶锯质粒DNA琼脂糖凝胶电泳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳影响琼脂糖凝胶电泳的因素DNA分子的大小:实验证明,DNA片段迁移距离与其分子量的对数成反比;琼脂糖的浓度:一定大小的DNA片段在不同浓度的琼脂凝胶中,电泳迁移率不相同;DNA分子的构型:不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的电泳速度差别较大。%溴酚兰;%二甲苯青;30%甘油水溶液作用:①增加样品密度,使其比重增加,以确保DNA均匀沉入加样孔内②在电泳中形成肉眼可见的指 示带,可预测核酸电泳的速度和位置③使样品呈色,使加样操作更方便滚岸牵斌怂悍虏斗狐镐护湖蓉庄压衍菇步加忌皮抨阜靠猩狄微壮桑三斌鄙质粒DNA琼脂糖凝胶电泳质粒DNA琼脂糖凝胶电泳