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一种高效提取虎耳草科植物基因组的方法
张得钧,高庆波,,段义忠,张发起,,陈世龙
.中国科学院高原生物适应与进化重点实验室中国科学院西北高原生物研究所,青海西宁;.中国科学院研究生院,北京
摘要目的探索从虎耳草科植物中提取的有效方法。方法采用改进的法,从种虎耳草科植物中提取。以提取的
为模板,利用通用引物“”和“”对虎耳草科植物叶绿体片段进行扩增。结果通过该方法提取的
纯度较高,质量较好。用所得进行扩增的产量高,可用于后续的测序等分析。对山地虎耳草的产物纯化后进
行测序,得到的序列。将其与中的虎耳草属其他植物的—序列进行比对分析,证实该序列为目标片
段的区域。结论该方法可有效去除次生物质对的干扰,提取的基因组可用于叶绿体—测序分析和其他遗传学
分析。
关键词虎耳草科;基因组提取;
中图分类号文献标识码文章编号———
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虎耳草科植物是双子叶植物,属,约有对较高,因而需要改良常规的分离方法。目前,针对虎耳草科
种,广泛分布于全球,主产温带。我国约有属,约植物的提取方法研究十分缺乏。因此,笔者选取虎耳草
种,南北均产,主产西南,该科大部分植物均具有重要的利用科具有药用价值的植物为研究材料,在等提取方
价值,被广泛应用于农业生产和人民生活中。山梅花法的基础上对其进行适当改进,建立了一套经济高效的
、虎耳草、溲疏提取方法,并对获得的进行了—片段的扩增。
、西南绣球、岩白菜—材料与方法
、八仙花等植物可美。材料供试材料为采集于青海、西藏、四川等地区的
化环境,为常用园艺观赏植物。虎耳草、黑蕊虎耳草. 种虎耳草科植物,植物名称、采集地点见表。
、岩白菜、落新妇、华金腰。主要提取试剂配方缓冲液:/.
、七叶鬼灯檠、尖叶茶花.,./,/。×缓冲液:
子冗等均具有药用价值,如黑蕊虎耳草/—.,./, / 。%
中岩白菜素没食子酸酯类对丙型肝炎丝氨酸蛋白酶有抑制。/;:氯仿/异戊醇:;异丙醇; 巯基
作用;尖叶茶花子提取物对蕃茄早疫病菌、西瓜枯萎病乙醇;;%乙醇。
菌、苹果炭疽病菌、黄瓜腐霉病菌、玉米小斑病菌、小麦赤霉。的提取参照等的方法并作适当改进,进
病菌、甘薯黑疤病菌均具有强烈的抑制作用,是一种潜在的行基因组的提取。提取步骤如下:在灭菌好的研钵中
新型杀菌剂;七叶鬼灯檠、.~.硅胶干燥的叶片,再加少许液氮和、干粉
和根均具鞣质,可提制烤胶。此外,虎耳草科岩白菜属的所后进行研磨,使其成粉末状;.
有植物均具有药用价值。加入预热的提取缓冲液,放入℃水浴恒温震
分子标记试验和其他许多分子生物学试验一样,是荡箱中左右;取出于℃/离心,弃
从研究生物个体的基因组开始的,能否得到高质量的上清液。加入左右预热的提取缓冲液和
基因组成为分子标记技术关键的一步。目前有多巯基乙醇,放人℃水浴恒温震荡箱中左右,
种提取方法:法、高盐低法、法¨、苯酚
每隔将离心管拿出后来回摇匀;取出加入等体积的
法¨和试剂盒法等