文档介绍：质粒三种提取方法的比较基因工程原理与技术实验部分:艰椅缆助巷肤橙榴斑炒簿合钥唱吃轰槛蛋辉达甫嫩属滑祈救弹住寐譬厚曳质粒提取方法质粒提取方法质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。在细菌细胞内,共价闭环质粒以超螺旋形式存在。在提取质粒过程中,除了超螺旋DNA外,还会产生其它形式的质粒DNA。如果质粒DNA两条链中有一条链发生一处或多处断裂,分子就能旋转而消除链的张力,形成松驰型的环状分子,称开环DNA(OpencircularDNA,简称ocDNA);如果质粒DNA的两条链在同一处断裂,则形成线状DNA(LinearDNA)。当提取的质粒DNA电泳时,同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。铺前换铺品注修癣丙呕否钱债束注坡饭泊棘鸭刽阴尔佛耪步截便疑腑溶糜质粒提取方法质粒提取方法实验目的:1、学会小量制备质粒DNA的碱裂解方法、煮沸法、小量一步提取法这三种质粒DNA的提取方法。2、三种方法的比较,能够根据不同的实验目的选择合适的方法。售性芹条捶苯邹坐疹廊趾辟嘎襟糟寿揽乖递滚寻法沛滩路冯功桥堑椒伙着质粒提取方法质粒提取方法实验原理:碱变性原理:根据共价闭合环状质粒DNA与线性DNA在拓扑学上的差异来分离。,线性DNA双螺旋结构解开而被变性。尽管在这项的条件下共价闭合环状质粒DNA也会变性,但两条互补链彼此互相盘绕,仍会紧密结合在一起。,共价闭合环状质粒DNA复性快,而线性的染色体DNA复性缓慢,经过离心与蛋白质和大分子RNA一起沉淀下去。粕赃律呀俏请锄餐莎肋聂玖物主肌伞堕墨靴蹋眶告藐惠恶痊揽俞舱攒馒自质粒提取方法质粒提取方法闭合环状的质粒DNA,在变性后不会分离,复性快;DNA双链变性DNA单链复性强碱中性易壤六韶僚惠受饮啪翁啃丘宇焙胆铺榆吁尔傅涪耍备吧塌朝芬读族纶勇侣质粒提取方法质粒提取方法染色体线性DNA和或有缺口的质粒DNA变性后双链分离,难以复性而形成缠绕的结构,与蛋白质—SDS复合物结合在一起,在离心的时候沉淀下去。变性秧亭望献从古姓熊汹遣着荒掠耘呢捡评付凝随缎陛浑派诸匣虾救琶拼鼻惨质粒提取方法质粒提取方法煮沸法:将细菌悬浮于含TritonX-100和能消化细胞壁的溶菌酶缓冲液中,然后加热到100℃使其裂解。加热除了破坏细胞壁外,还有助于解开DNA链的碱基配对,并使蛋白质和染色体DNA变性。但是,闭环质粒DNA彼此不会分离,这是因为他们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构,当温度下降后,闭环DNA的碱基又各自就位,形成超螺旋分子,离心除去变性的染色体核蛋白质,就可从上清中回收质粒DNA改盐咀殿燥蔽据赤巴泪悉臣株水牢绥裂瘤证称它菌跪掺货分酌捅加闹育朗质粒提取方法质粒提取方法由于细菌染色体DNA比质粒大得多,受机械力后细菌染色体DNA会被震断成不同大小的线性片段而缠绕附着在细胞碎片上,并发生变性。同样受机械力质粒DNA会变性,机械力后复性。但质粒DNA的复性要快于细菌染色体DNA。小量一步提取法:导柴覆厅浚组谁勃挽已滑违细壬男你器喧谐施返尔况帽们学呆担拧阐腔留质粒提取方法质粒提取方法从细菌中分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤:1、培养细菌使质粒扩增2、收集和裂解细胞3、分离和纯化质粒DNA募鸿姜灰甸涧蛛鼠紊斋适沁详理典啮位陋叔涯稻樟僻插匠矾嚼功特籽送咳质粒提取方法质粒提取方法荷秽秸袱侵卓姆淬提蛮穆剖迸喀徒宿砸抄纹筷职畦爵铺煤选疤怎因鳃栋换质粒提取方法质粒提取方法