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正常赴泶锖头置的调节激活作用质辕轮状病毒扫描电子显微镜咸枪沧T嗽靥錶透射电子显微镜三羟甲基氨基甲烷盐酸四乙基若丹明异硫氰酸尿苷末端缺口末端标记盐劬重庆医科大学博士研究生学位论文ⅲ.琹诅
轮状病毒感染动物模型建立及其发病机理研究摘要目的轮状病毒,且鹩び锥剐旱淖钪饕2原,同时也可引起肠外脏器损害,致病率及病死率均较高,但目前对哉兆槊恐蝗槭缶诮又其发病机制仍未完全清楚,也未能研制出很满意的疫苗。本实验通过猴一感染生后炖ッ魅槭螅腥镜娜槭蠖锬型,并用该动物模型研究轮状病毒腹泻及肠外脏器损伤发病机制,为疫苗研制及更好地防治感染提供理论依据。方法以恒河猴胚肾细胞培养猴┰觯空斑实验滴定病毒滴度,分装,一℃保存备用。.ב正常无病毒对照培养细胞冻融液。感染后天珼咳展鄄烊槭蠡疃榭觥⒚ü庠蟆⒋蟊惚浠体重变化,并收集大便经觳馄渲蠷乖瞻呤笛榈味其中滴度,建立轮状病毒感染动物模型。在、、魇奔涞闳⌒〕ψ橹漳揪灰梁烊旧琀染色光镜下观察形态学改变,并用图像分析软件,.测定空肠绒毛高度和隐窝深度;取粘ψ织%戊二醛固定后送电镜切片观察肠上皮细胞超形结构改变;取、重庆医科大学博士研究生学位论文
出现病变,表现为拉网、细胞圆缩、脱落,觳”淇纱锏截Α粘κ衅妹庖咦榛旧üü;取粘κ衅肨ḿ觳獬ι掀は赴坏蛲觯以研究肠炎腹泻发病机制。取槭竽浴⒎巍⑿摹⒁取⒏巍肾组织,石蜡切片染色光镜和电镜观察病理改变:用免疫荧光法检测抗原在各脏器分布;以逾畆染色观察、槭笮脑嗨孔醇《鞍追植疾⒂肐测量、砑计分析;,感染后旒纯。空斑实验滴定所收集的病毒液,滴度为噬斑形成单位感染后乳鼠出现腹泻,活动减少,皮毛光泽差,肛周可见粪便污染。腹泻潜伏期为天,持续约天,感染后第天腹泻最重,感染后第焖腥槭笸V垢剐骸8腥竞笕槭蟠蟊鉘原阳性且便中有病毒排出,蟊鉘味ń峁来挝.×痬槭蟾剐涸窖现兀浯蟊鉘味纫苍礁摺剐对乳鼠体重未见明显影响。,/。,、、、辴.×.×.×.×.×.×重庆医科大学博士研究生学位论文
未见明显改变。电镜下见心肌细胞肌丝溶解,滑面内质网扩张,线粒肝、胰、肾组织中均检测到抗原。孔醇《鞍兹旧乳鼠感染后光镜下见小肠肠壁和绒毛轻度充血水肿,绒毛萎缩,绒毛上皮细胞广泛空泡状变性,未见有明显炎性细胞浸润及肠壁坏死等表现。电镜下见绒毛上皮细胞空泡变性部位呈大量脂滴样结构,微绒毛排列紊乱或脱落,而细胞间连结未见明显结构改变。、、、粘κ衅琀旧ú⒕璉测量及砑臣品治鱿允荆篟腥竞笫笛樽楹投哉兆榭粘θ廾ǜ叨缺较型臣蒲б庖,提示绒毛有萎缩;、可见两组肠隐窝深度有差异,,实验组肠隐窝增生明显;θ廾ǜ叨群统σ焉疃缺戎涤胁钜,表明其后绒毛上皮增生趋于正常。免疫组化检测提示抗原分布主要在小肠绒毛的上部。丝状肌动蛋白染色显示笔笛樽乳鼠空肠组织丝状肌动蛋白含量有明显减少,但其后则两组无显著差异。原位细胞凋亡检测显示感染后空肠上皮细胞凋亡增加。比∪槭竽浴⒎巍⑿摹⒏巍⒁取⑸鲎橹饩迪孪允厩岫心肌间质性水肿、轻度心肌细胞浊肿,肝组织轻度充血、肝细胞空泡样变性,肾小球和肾问质轻度充血、肾小管轻度浊肿,而脑、肺、胰体内室肿胀,核周间隙增宽。免疫组化显示除脑组织外,肺、心、显示、募∷孔醇《鞍缀扛谋洳幻飨浴T幌赴凋亡检测显示肝细胞凋亡明显,而心肌细胞未见明显凋亡。检测显示脑、肺、心、肝、胰、肾组织中均检测到核酸。、重庆医科大学博士研究生学位论文
结论感染昆明乳鼠动物模型建立成功。主要感染小肠成熟绒毛上皮细胞。腹泻的发生与小肠绒毛上皮细胞骨架损害、微绒毛损害、细胞凋亡脱落和绒毛萎缩相关,但与肠上皮细胞间连接损害关系不大。可由肠道向全身播散,并造成肠外多脏器不同程度损害。造成肠外脏器损害的机制不除外病毒局部增殖破坏组织的可能,也可能由于病毒结构蛋白或非结构蛋白作用造成,如影响丝状肌动蛋白合成,破坏细胞骨架等。病毒感染引起细胞凋亡增加也是造成肠外脏器损害的机制之一。关键词轮状病毒,感染,乳鼠,动物模型;发病机制重庆医科大学博士研究生学位论文
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