文档介绍：肁薆螅膅袀袀实验报告膆蚃袃羀薇莄蚂肀实验课程:微量凯氏定氮法测定蛋白质含量羇学生姓名:xxx螂学号:xxx莀专业班级:xxx膀膄薄腿芀薅羂膂芀羆蚄羁2017年4月11日荿实验背景:莇凯氏定氮法:测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。该方法在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收,再以标准碱滴定,就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定,可由物质含氮量计算其蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法。膂实验目的螀1、掌握凯氏(Kjeldahl)定氮法测定蛋白质含量的原理方法;葿2、学会使用凯式定氮仪。蒄实验原理袄蛋白质是含氮的化合物。凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热,经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程,最后有机氮转变为无机氮硫酸铵,这一过程称为有机物的消化。消化完成后,将消化液转入凯氏定氮仪反应室,加入过量的浓氢氧化钠,将NH4+转变成NH3,通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接收瓶内,硼酸接收氨后,形成四硼酸铵,然后用盐酸标准溶液滴定,直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数,通过计算即可得出总氮量。测定出的含氮量是样品的总氮量,其中包括有机氮和无机氮。以甘氨酸为例,其反应式如下:葿NH2CH2COOH+3H2SO4→2CO2+3SO2+4H2O+NH3(1)2NH3+H2SO4→(NH4)2SO4(2)蕿(NH4)2SO4+2NaOH→2H2O+Na2SO4+2NH3↑(3)袅实验器材和试剂节1、实验器材:凯氏定氮蒸馏装置、50ml锥形瓶3个、酸式滴定管、酒精灯薂虿芆2、实验试剂:浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、2%、定氮仪的洗涤蚆(1)测定前定氮装置如下法洗涤2~3次:从样品进口入加水适量(约占反应管三分之一体积)通入蒸汽煮沸,产生的蒸汽冲洗冷凝管,数分钟后关闭夹子P3,使反应管中的废液倒吸流到反应室外层,打开夹子P1由橡皮管排出,如此数次。蒁(2)用蒸汽洗涤反应室约10min后,在冷凝管末端小玻璃管的位置放上一个盛硼酸-指示剂混合液的锥形瓶,将瓶倾斜,以保证冷凝管末端连接的小玻璃管完全浸于液体内。继续蒸馏1~2min。观察锥形瓶内溶液是否变色,如不变色,则证明反应室内部已洗涤干净;如果混合液变绿,说明定氮仪内有残留氨,没有洗涤干净,需要进一步用蒸汽洗涤。聿2、蒸馏衿(1)准备工作:蒸馏器洗净后,开放水龙头P3,使水进入A室,水放至A室球部2/3处即可。取3个50ml的锥形瓶,分别加入10ml硼酸(内加有混合指示剂)。用表面皿复盖备用。肇(2)加样:用移液管吸取2ml消化液,小心地由漏斗D倾入B室,用少量蒸馏水冲洗漏斗D。取一个盛有硼酸的锥形瓶,置于M管下,使管口置于硼酸溶液液面以下,将P4夹紧,向漏斗D加入30%氢氧化钠5ml,慢慢松开P4,使氢氧化钠进入B室,但漏斗中始终保持一部分液体封闭,往漏斗加入少量蒸馏水,重复以上过程,全程都要保持漏斗中的液体封闭。膃(3)蒸馏:用酒精灯加热,维持火力恒定,沸腾不可高于Y管口以免A室溶液从Y管倒吸,待第一滴蒸馏液从冷凝柱F顶端滴下时起,继续蒸馏5分钟,然后将锥形瓶放低,使导管离开液面再蒸2分钟,最后用蒸馏水洗导管外壁,蒸馏完毕,取下锥形瓶准备滴定。肂(4)空白蒸馏:用移液管分别吸取2ml蒸馏水按上述操作步骤进行蒸馏。衿3、滴定膄蒸馏完毕,用微量酸式滴定管,,溶液由蓝绿色变为淡紫色或灰色,即为终点。记录所用盐酸的量。羅实验结果处理袁1、实验数据羈实验次序薅实验试剂莃1蚀空白肈2羆样品1肅3葿样品2膈蒸馏水/ml莇1薃0蒂0芈样液/ml薄0芅1芁1莈NaOH/ml羅5蚂5罿5蒈消耗HCl/、计算:若测定的样品含氮量部分只是蛋白质则:样品的总蛋白含量(%)=式中:A为滴定样品用去的盐酸平均毫升数;B为滴定空白用去的盐酸平均毫升数;C为称量样品的毫升数;(实际上,此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写);14为氮的原子量;;100是配出的100ml消化液;10是面粉质量10g样品的总蛋白含量(%)=由资料知面粉含量如图该实验数据测得的蛋白质量略高出标准值误差分析与讨论1、误差分析(1)通常情况下,蛋白质含氮量在16%左右,。但是,实际上不同来源的蛋白质的氨基酸组成差别很大,含氮量的差别也很大,如乳制品、面粉、%、%%,、。,会导致蛋白