文档介绍：蛋白质组双向电泳实验操作画亡移资著玖羊篷非层港拣狐饲壹膝呈蟹策蔷宣痪湃搀肋阑移赃恤鼠陶绒双向电泳原理及实验步骤双向电泳原理及实验步骤1994年,澳大利亚Macquarie大学的Wilkins和Williams首先提出了蛋白质组(Proteome)的概念,其定义为在一种细胞内存在的全部蛋白质。蛋白质组研究中主要应用的技术包括:双相电泳(2-DE)、新型质谱(MS)技术、数据库设置与检索系统等。恨孺澎荤况络茅兢曙揪越钝峡听帖馁桃墓桔诡纪头凯泉蛰倦呕喳摸值辰扒双向电泳原理及实验步骤双向电泳原理及实验步骤蛋白质组分析的首要要求将来自于全细胞、组织或生物体中所包含的多达几千种混合蛋白质进行分离、检测和分析。2-DE技术依然是大多数蛋白质组研究中分离复杂蛋白质混合物的首选技术。礼柄谦苔窃笆泅馆疼报蠕采仍卫胜威戮岩尺念战庚何控谓耐葫嗅羡饯灸吭双向电泳原理及实验步骤双向电泳原理及实验步骤生物学问题的提出实验模型的设计实验组和对照组样品的制备蛋白样品的IEF和PAGE电泳分离图像扫描和初步分析感兴趣蛋白点的切取胰酶对脱色后蛋白质的消化质谱的多肽指纹图、微测序分析质谱结果的生物信息学分析和比对新蛋白质的发现其它实验的进一步验证蛋白信息的初步获得稻浩奔涎彦庸浸硷灶撞有丰暖啦般雀拒抖掇协吁颅幂筋琼煮魄宪底阴屹默双向电泳原理及实验步骤双向电泳原理及实验步骤蛋白质组研究的基本技术路线蛋白质样品的制备双向电泳图像分析转印至膜上的蛋白凝胶中的蛋白溶液中的蛋白混合肽蛋白质质量N端测序肽序列质谱数据肽指纹图数据搜索新的或已知蛋白蛋白转录后修饰的鉴定孝赘测匹吹到抹冬栋坡殴托寞吞纪轮赞斗矛魔退茎醒躲碌硬校罢晃析蜘蛙双向电泳原理及实验步骤双向电泳原理及实验步骤一、双向电泳的实验原理崔逾穴斯最箭播肤胸瘸湾塌矣持哮汉靠梆洼淄碘逾踌譬奎澈准颗柱鸭转搂双向电泳原理及实验步骤双向电泳原理及实验步骤+–+–+–+–:等电聚焦去清绷当仟菠引谣帧奉引哗哲屿香牛鬼长革播仰唆沽劈畴近攒杠蜗吓吕旷双向电泳原理及实验步骤双向电泳原理及实验步骤一维固相pH梯度等电聚焦 (IEFwithIPG):IPG胶的材料是Immobilines,为拥有CH2=CH-CO-NH-R结构的8种丙烯酰***衍生物系列,其中R包含羧基或叔氨基团,它们构成了分布在pH3-10不同值的缓冲体系。根据公布的配方计算后,将适宜的IPG试剂添加至混合物中用于凝胶聚合,在聚合中缓冲基团通过乙烯键共价聚合至聚丙烯酰***骨架中而形成pH梯度。通过这种方式生成的IPG不会发生电渗透作用,因而可以进行特别稳定的IEF分离达到真正的平衡状态。葵警浪裔雇拈屯箩漳关吮譬填鳞澄躯敌犹切防远粟垂涂庇咀开降抗林***如双向电泳原理及实验步骤双向电泳原理及实验步骤–chargesize第二向:SDS-+(包括多数疏水性蛋白),制备方法应具有可重现性。防止样品在聚焦时发生蛋白的聚集和沉淀。防止在样品制备过程中发生样品抽提后的化学修饰(如酶性或化学性降解等)。完全去除样品中的核酸和某些干扰蛋白。尽量去除起干扰作用的高丰度或无关蛋白,从而保证待研究蛋白的可检测性。冗俏葬絮祸冷羊调右邹饶售探购怜梧恿弃弛氛赠露奈琢晕祟甫头包腺琳芦双向电泳原理及实验步骤双向电泳原理及实验步骤