文档介绍：流式细胞仪分析技术及应用*1检验本科流式细胞术(FCM)——是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。(图1、2、3)Date2检验本科第一节流式细胞仪的分析及分选原理流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成。流式细胞术所具有的分析和分选功能主要涉及光学原理、光电转换原理和测试原理三部分。Date3检验本科一、工作原理㈠基本组成结构1、液流系统:由样本和鞘液组成。样本:待测细胞被制备成单个细胞的悬液后经荧光染料标记的单克隆抗体染色;鞘液:是辅助样本流被正常检测的基质液。作用(图4)Date4检验本科2、光学系统:由激光光源、分光镜、光束成形器、透镜组和光电倍增管组成。⑴激光光源:多为气冷式氩离子激光器,其激光束波长为488nm,15mW。⑵分色反光镜:反射较长波长的光,通过较短波长的光。⑶光束成形器:将激光器发射的激光束聚焦成高15μm、宽57μm的椭圆光斑。Date5检验本科⑷透镜组:将激光和荧光变成平行光,同时除去离散的室内光。⑸滤片:长通滤片一允许长于设定波长的光通过;短通滤片一允许短于设定波长的光通过;带通滤片一允许一定带宽波长的光通过,其他波长的光不能通过。⑹光电倍增管:检测荧光和散射光,同时将光学信号转换成电脉冲(数字数据)信号。(图13)Date6检验本科3、数据处理系统:主要由计算机及其软件组成。Date7检验本科㈡基本工作原理标志了特异性荧光染料的单细胞悬液经喷嘴高速射下,与水平方向的高度聚焦的激光束垂直相交,单个细胞上标记的荧光染料在通过激光光斑时被激发而产生特异性荧光,同时,由于混合细胞群中细胞大小和胞内颗粒的多少会被激发而产生不同的散射光。在入射光束与液柱垂直的方向有荧光检测系统和散射光感受系统,用于收集荧光信号和侧向散射光信号,前向散射光感受器在前向小角探测接受前向光信号。Date8检验本科被接收的光电信号被光电倍增管转换成电压脉冲和积分脉冲,使信号放大,该信号进入计算机系统进行数据转换、储存、分析、处理,按不同的检测设计采用相应软件程序对结果进行综合分析,并以图像和数据显示于荧光屏上。流式细胞仪产生分析的电信号主要是光散射信号和荧光信号,流式细胞仪依据细胞流经光照射区时电压讯号的强弱来分析和分选细胞。(图5)(图10)Date9检验本科二、散射光的测定细胞对光的散射是细胞在未遭受任何破坏情况下固有的特性。Date10检验本科