《实验五、pcr基因扩增》.ppt

文档介绍：PCR基因扩增一、实验目的通过本实验学****PCR反应的基本原理与实验技术二、实验原理PCR是一种由引物介导的选择性体外扩增DNA的方法,:变性(Denature):目的双链DN***段在94℃下解链退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对延伸(Extension):在TaqDNA聚合酶合成DNA的最适温度下,以目的DNA为模板进行合成由这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍,这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板,所以经25~35轮循环就可使DNA扩增达106倍5’3’5’3’DoublestrandedDNAtemplateRegiontobeamplified5’3’5’3’plementofthissequenceDoublestrandedDNAtemplate5’3’5’3’PCRCycle1PrimersTaqTaqDoublestrandedDNAtemplate5’5’3’3’PCRCycle1Denaturation95℃strandsseparatePrimersTaqTaqTaqpolymeraseisthermostable3’5’5’3’Annealing~55℃PrimersbindTaqTaqForwardprimerannealstolowerstrandReverseprimerannealstoupperstrandPCRCycle13’5’5’3’Annealing~55℃TaqbindsTaqTaqPCRCycle13’5’5’3’Extension72℃TaqcopiesDNAstranddNTPsTaqTaqTaqsynthesisesDNAinthe5’to3’directionPCRCycle1