在单倍体育种中，具体步骤.doc

文档介绍：在单倍体育种中,具体步骤如下:
培养基的选择和配制
培养基是离体花药生长发育的能源和营养基地,培养基的成分合适与否是培养成败的关键之一。
培养基种类很多,按其作用分:诱导花药产生愈伤组织的,称诱导培养基,也叫第一培养基;使愈伤组织分化出根、芽的,称分化培养基,也叫第二培养基。若按其成分来源则可分为人工合成和简化培养基。过去花药培养水稻、小麦常用的是米勒(Miller)与MS培养基。后来我国研究成功的N6、籼诱Ⅰ、籼诱Ⅱ培养基,都比米勒和MS为好。另外用马铃薯简化培养基效果也很好。其做法是:称取定量马铃薯(每升培养基200克)洗净,切成小块(不削皮),加一定量的蒸馏水煮沸30分钟,用两层纱布过滤,余下的渣滓用同样的方法再煮一次,并过滤。两次滤液加在一起不要超过培养基总体积的45%,然后加入其它附加成分。培养小麦花药的,加蔗糖9%,铁盐同MS,2,4-D2毫克/升,。培养水稻花药加蔗糖6%,铁盐同MS,2,4-D2毫克/升。
几种常用培养基的配方,如表1。
表1 几种常用培养基配方
单位:毫克/升
培养基类别
化合物
米勒
(Miller旧称
Blaydes)
MS
(Murashige
和SKOOg)
怀特
(White)
氮6
(N6)
禾谷类
通用
***钾(KNO3)
***铵(NH4NO3)
***钙[Ca(NO3)2••4H2O]
磷酸二氢钾(KH2PO4)
磷酸二氢钠(NaH2PO4•H2O)
***化钾(KCl)
***化钙[CaCl2•H2O]
硫酸镁(MgSO4•7H2O)
硫酸钠(Na2SO4)
硫酸铁(Fe2(SO4)3)
1,000
1,000
347
300
-
65
-
35
-
-
1,900
1,650
-
170
-
-
440
270
-
-
80
-
300
-

65
-
720
200
**
2830
-
-
400
-
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166
185
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-
3000
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-
-
-
166
185
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H培养基铁盐:-EDTA(乙二***,四乙酸二钠)•7H2O(硫酸亚铁)溶于一升水,每升培养基取此液5毫升
同H培养基铁盐
同H培养基铁盐
络合铁(Na-Fe-EDTA)
柠檬酸铁(FeC6H5O7)
硫酸锰(MnSO4•4H2O)
硫酸锌(ZnSO4•7H2O)
硫酸铜(CuSO4•5H2O)
硼酸(H3BO3)
碘化钾(KI)
钼酸钠(Na2MoO4•2H2O)
***化钴(CoCl2•6H2O)
肌-肌醇(又称环己乙醇)
32*
-


-



-
-
2



30,000
10,000

-
-







100
2



30,000
-
-
7
3
-


-
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_
3



20,000
10,000