文档介绍：实验一、显微镜的结构与使用方法
实验目的
认识显微镜的构造
学会独立操作显微镜
仪器和材料
显微镜、擦镜纸、装片
实验内容
学生按编号把自己的显微镜取出,放在试验台上,在教师的指导下熟悉显微镜各部分的构造及用途,然后进行操作练****先用低倍镜进行对光联系,使视野明亮而均匀。如果使用双筒目镜,还应学****目镜间距的调节。在转换高倍物镜观察,此时应注意它的视野亮度与低倍物镜有无区别?并思考通过哪几种方法调节使得高倍物镜的视野达到要求的亮度。
取已制备好的装片进行观察:按低倍镜使用步骤和方法进行操作练****注意要使观察到的像向前移动时,玻片标本应向那个方向移动?欲使观察到的像向右移动时,拨片标本应向那个方向移动?
观察制备好切片:细胞核、中心体、胞间连丝、有丝分裂、减数分裂、高尔基体等。
观察完毕后,按正规要求取下玻片,把显微镜收好。
作业
绘制2-3中细胞结构
实验二、Feulgen反应显示DNA
(一)实验目的
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(二)实验原理
Feulgen在1924年发明一种对DNA特异的组织化学染色反应,故称Feulgen反应。
DNA经酸(1mol/L HCl)水解后,DNA分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被打开,脱氧核糖的一端释放出醛基,并在原位与Schiff试剂反应形成特异性的紫红色产物。该产物能特异地吸收峰值为550~570nm的光波。并且在一定的浓度范围内,对550~570nm光波的吸收值与DNA含量成正比关系,既符合化学计量学关系。此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应,观察DNA的分布,又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。紫红色的产生,是由于反应产物的分子内含有醌基,醌基是一个发色团,所以具有颜色。对照组或采取不经盐酸处理,或预先用热三***醋酸或DNA酶处理,抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应。
Feulgen反应对DNA染色稳定、颜色鲜明、能定量,因此在细胞化学和组织化学中成为一个既古老、传统又经久不衰的DNA标记方法。
(三)实验器具与药品
恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜
(1)1mol/L HCl:,。
(2)Schiff试剂:,时时摇荡玻璃瓶,煮5min,使之充分溶解,然后冷却到50℃时过滤。滤液中加入10ml的1mol/L HCl,冷却到25℃(Na2S2O5)或偏重亚硫酸钾(K2S2O5)。在室温下静置24小时,其颜色呈褐色或淡黄色,,摇1min,过滤,滤液为无色。置棕色瓶密封,4℃保存。一般可以保存数月。
(3)%亮绿水溶液(可稀释1~5倍使用)。
(4)Carnoy固定液:95%酒精:冰醋酸=3:1
(4)亚硫酸氢钠溶液:10%NaSO3母液5ml,1mol/L HCl 5ml加蒸馏水至100ml,用时现配。
(5)5%三***醋酸
(6)二甲苯
四膜虫、酵母、洋葱根尖
(四)实验方法
临时性的标本片是指在进行实验观察时,临时制备的不能长期保存的标本片。制备方法如下:
取一张载玻片,用左手拇指和食指夹持载玻片的两端,右手的拇指和食指夹着一块清洁而柔软的布,把载玻片放在两手指加着的布间,然后均匀地前后移动擦净载玻片的两面;盖玻片小而薄,擦时必须小心,把一张盖片平放在左手两指间夹着的布间,并轻轻捏住,右手指夹持盖玻片的边缘向一个方向转动进行擦拭,用力需轻而均匀(如果盖玻片上有油或其它难以擦净的东西,可滴加医用酒精后再用布擦)。把擦净的载玻片平放在桌上,用吸管小心吸取要观察的标本悬液,滴一小滴于载玻片的中央,然后用镊子轻轻夹住盖玻片的一端,将其对侧端先接触载玻片上悬液,慢慢地倾斜盖下防止产生气泡,再用吸水纸吸取多余的水分。如标本需要染色,可将染液滴在盖玻片的一侧(不要滴在盖玻片上),用吸水纸在盖玻片的另一侧边缘吸水,染液就会流入盖玻片的下方使标本着色。如果使用染缸进行染色,则待细胞悬液干了之后,固定、染色在染缸中进行。
(1)取少量四膜虫培养液涂于载玻片上,用牙签涂布开,空气中干燥。
(2)取少量酵母培养液同上操作。
(3)Carnoy固定液中固定10~30min。对照组1在预热(90℃)三***醋酸溶液中处理15min。
(4)1N盐酸(60℃)浸15min。对照组2不经盐酸处理。
(5)入Schiff试剂作用40分钟到1小时(加罩,避光)。
(6)取出载玻片立即用新配制的亚硫酸氢钠溶液洗两次,每次2min