文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
关节软骨细胞生物学行为及自体移植的实验研究
姓名:周新社
申请学位级别:博士
专业:外科学(骨科)
指导教师:戴尅戎
20040401
英文缩略词一览表互补脱氧核糖核酸’.二氨基联苯胺乙二胺四乙酸葡萄胺聚糖信使核糖核酸自体软骨细胞移植软骨生长因子流式细胞术·苏木精伊红染色胰岛素样生长因子间充质于细胞磷酸缓冲液分裂次数血小板源性生长因子转数/’·’疭猯産產
关节软骨细胞生物学行为及自体移植的实验研究人负重关节软骨细胞的分离培养技术;探讨人关节软骨细胞在单层培养过程中其研究目的:观察分析关节软骨细胞体外单层培养时其生物学行为变化、复层培养对其生物学行为的影响和自体软骨细胞移植薷垂亟谌砉侨彼稹=生物学行为赴鲋场⒈硇秃偷蛲的变化;观察复层高密度培养韵鲁聘层培养缘ゲ愦ù嘌牡谒拇砉窍赴纳镅形5挠跋欤黄兰鄞车暮复层培养的自体软骨细胞移植修复软骨缺损的效果,为临床开展自体软骨细胞移在。嘌淠谙刃蠴.%,观察软骨细胞获得率及细胞活性;这些软骨细胞在%中培养,例病人的软骨细胞在%中进行单层传代培养,观察原代、第代和第院蟮南赴翁Ц谋洌患觳獾到第赴谋对鍪奔第、赴鸌徒涸庖咦橹旧ɡ垂鄄煜赴硇偷母谋湟约傲魇较头猪膝关节软骨标本经上述方法分离得到的软骨细胞传代培养第四代后,分别进入鲎楸穑旱ゲ闩嘌鴏周组、复层培养茏椤周组和茏椤原和葡萄胺聚糖核心蛋白的表达;对单层培养堋⒏床闩嘌芎周时的细胞计数,观察细胞倍增时间的变化,〉娜层软骨缺损鋈彼,右膝为空白对照级和自体骨膜移植对照组,左膝为单层培养细胞组和复层培养细胞组,上下缺损随机进入各对照和试验组。术后个月行大体、组织学、免疫组织化学检查评价软骨缺损的修复质量。结果:~可消化尽软骨标本敝型咎崛∠赴次赴竦寐饰植、提高其治疗效果提供实验依据。方法:蚣偬逯没弧⒅琢鍪质跏苯叵碌母褐毓亟谌砉强榛导羲楹螅观察小时细胞贴壁率以及细胞生长状况。胞分析第、代细胞增殖指数和细胞凋亡。半定量检测复层培养前周周和苁钡娜砉窍赴腎、型胶指数和细胞凋亡的改变。中文摘要上海第二医科大学级博士论文
得率和细胞存活率;在%中进行单层传代培养χ芎罂纱锏代,鲜龇椒ɑ竦玫南赴薪械ゲ愦ù嘌赴纱一第氲代差异均有显著性,细胞型胶原染色逐渐变浅,培养组缺损被塑形良好的修复组织覆盖,组织学、基质特殊染色示修复组织的中、代,前嘌奔淦骄士欤け妒骄鵷倍,倍增时间为孀糯ù问脑黾樱细胞形态由原代的多角形转变为第代的短梭形,第代的成纤维细胞形态;谥鸾パ映ぃ代与第降、氲、代,第代与第代,均有显著性差异,.;细胞增殖指数随着传代次数的增加而逐渐减小,第氲、第赴陨ū鹊代减少,而到第唤鱿赴翁悠陶梗赴陨逋獾ゲ闩嘌代的软骨细胞经复层培养后芎螅赴翁员3多角形或圆形,细胞蜷缩;,延长,培养赴浦彩鹾个月,空白对照组缺损仅被少量的纤维组织覆盖,周边正常软骨发生退变;单纯骨膜移植对照组修复组织变化较大,组织学仍主要为纤维组织,且与周边组织整合不良,紧邻软骨下骨部位有少量的软骨形成;单层深层为纤维软骨和透明软骨,与周边组织和软骨下骨整合良好;与单层培养组相型胶原酶消化掷胂赴超过时中途提取细胞,有较高的细胞获细胞数可达..个,可满足临床上修复~砉侨彼鸬男枰!逋獾ゲ闩嘌娜烁褐毓亟谌砉窍赴孀糯ù..%,细胞贴壁率为士.%。.士天。亦明显减少;、、赴蛲鲋甘醇飨缘母谋。,,苁贝锔叻,。比,复层培养组修复组织的细胞形态、基质染色更接近正常软骨,组织的塑性更佳。四组的疍砉亲橹翁婪址直鹞,.、.:.、.士.,:人负重软骨标本,经ヒ鹊鞍酌赶一%上海第二医科大学级博二卜论文
的增殖能力逐渐下降,细胞凋亡未见明显的改变。第代细胞能较好地保持蕴迦砉窍赴浦渤晒Φ匦薷戳巳ú愎亟谌砉侨彼穑薷醋橹O宋骨和透明软骨,且能与邻近组织很好地整合;复层培养移植组修复组织的塑性较多角形转变短梭形,继而成纤维细胞形态;细胞分泌的型胶原逐渐减少;细胞ù嘌蟮墓亟谌砉窍赴逋飧奈8床愀呙芏扰嘌螅赴鲋逞速下降,但短期内仍保留较弱的增殖活力;细胞内型胶原和在升高,注射组更接近正常软骨。软骨细胞单层培养复层培养自体软骨细胞移植增殖软骨细胞的生物学行为,可作为软骨组织工程的种子细胞来源。软骨细胞的表型得到恢复;细胞凋亡增加。关键词:软骨表型凋亡缓5诙娇拼笱恫┦柯畚
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