文档介绍：人乳头瘤病毒基因分型液态芯片的构建
STRONG【摘要】/STRONG目的:通过构建人乳头瘤病毒基因分型的液态芯片,建立高通量、灵敏和特异的HPV型别检测系统。方法:在LuminexTM平台上,采用国际公认的标准HPV质粒建立13种基因分型HPV芯片,选择引物及探针,将探针有效的偶联到微球上。结果:用LuminexTM平台建立了13型HPV芯片,对单一或两种标准质粒混合的样品均可准确分型。对分型检测的阳性标本进行基因测序,经美国NCBI数据库BLAST比对符合其检测型别。结论:利用LuminexTM平台构建了13种HPV型别液相芯片的诊断体系,具有高通量、快速准确等特点,适用于大规模临床样本的HPV基因分型的诊断。
STRONG【关键词】/STRONG人乳头瘤病毒(HPV)基因分型芯片
人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)基因分型,对临床HPV感染疾病的诊断与Medicine治疗具有重要的意义。目前采用的PCR检测技术假阳性率较高、Southernblot或反向杂交方法进行操作繁琐,一次检测样本量有限,限制了其大规模筛查中的需要。我们拟利用LuminexTM平台系统[1-3],构建人乳头瘤病毒基因分型的液态芯片,建立特异性强、高通量、高灵敏度的HPV型别检测系统。
STRONG 1材料和方法/STRONG

HPV31、HPV35、HPV56全基因序列质粒,由美国ResearchandDevelopmentDigeneCorporationAttilaLrincz教授惠赠;HPV58全基因序列质粒由日本ToshihikoMatsukura教授惠赠;HPV45、HPV51、HPV53全基因序列质粒,由德国HeidelbergE.;HPV6、HPV11、HPV16、HPV18含HPVL1区质粒的菌悬液,由第四军医大学皮肤科惠赠。fluorescencelabeledpolystyrenebeads(Luminexmicrosphere荧光聚苯乙烯球,直径为5600nm,带有功能性羧基,×109/L)购自Luminex公司。
TMAC(temtrameihylammdniumchloride)Lot043k82108、MES(2[NMorpholino]ethanesulfonicacid)()lot042k5467;NLauroylsarcosineSodiumSaltLot082k1028均购自Sigma公司,EDC:1ethyl3(3dimethylaminopropyl)carboclirmidehyddrocloride购自Pierce(Rockford,IL);streptavidinphycoerythrin(SAPE):购自MolecularProbesLot:83C2
1。

根据LuminexTM平台系统的要求,选择GP5+/GP6+系统,采用deRodaHusman[4]设计。.
JACOBS[5],通过使用美国NCBI数据库做BLAST比对研究。

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