文档介绍：实验九: 食品中维生素C的含量测定
一、目的要求
理解2,4–二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸总量的基本原理。学****其操作方法和了解影响测定准确性的因素。
二、实验原理
总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二***古乐糖酸,样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4–二硝基苯肼作用生成红色脎,其呈色强度与总抗坏血酸含量呈正比,可进行比色定量。
三、仪器与试剂
(一)试剂
1、:量取250mL浓硫酸小心加入700mL水中,冷却后用水稀释至1000mL。
2、85%硫酸:小心加900mL浓硫酸于100mL水中。
3、2% 2,4–二硝基苯肼:溶解2,4–二硝基苯肼2g于100mL ,过滤。不用时存于冰箱内,每次使用前必须过滤。
4、2%草酸溶液。
5、1%草酸溶液。
6、1%硫脲溶液:溶解1g硫脲于100mL1%草酸溶液中。
7、2%硫脲溶液:溶解2g硫脲于100mL1%草酸溶液中。
8、1mol/L盐酸:取100mL盐酸,加入水中,并稀释至1200mL。
9、抗坏血酸标准溶液:称取100mg纯抗坏血酸溶解于100mL 2%草酸溶液中,此溶液每毫升相当于1mg抗坏血酸。
10、活性炭:将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中,回流1h~2h,过滤,用水洗数次,至滤液中无铁离子(Fe3+)为止,然后置于110℃烘箱中烘干。
(二)仪器
1、恒温箱或电热恒温水浴锅。
2、可见光分光光度计。
3、捣碎机。
四、实验步骤
1、样品处理(全部实验过程应避光)。
(1)鲜样的制备:称取100g鲜样即加入100mL 2%草酸溶液,倒入捣碎机中打成匀浆,~(含1mg~2mg抗坏血酸)倒入100mL容量瓶,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀。过滤,滤液备用。
(2)干样制备:称取1g ~ 4g干样(含1mg~2mg抗坏血酸)放入乳钵内,加入等量的1%草酸溶液磨成匀浆,连固形物一起倒入100mL容量瓶内,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀。过滤备用。
2、样品还原型抗坏血酸的氧化处理
,加入2g活性炭,振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液。, 2%硫脲溶液,混匀,此试样为稀释液。
3、呈色反应
(1)取3支试管,各加入4mL经氧化处理的样品稀释液。基中一支试管作为空白, 2%2,4–二硝基苯肼溶液,将所有试管放入37℃±℃恒温箱或恒温水浴中,保温3h。
(2)3h后取出,除空白管外,将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室温,然后加入2%2,4–,在室温中放置10min~15min,后放入冰水内。其余步骤同试样。
4、85%硫酸处理
当试管放入冰水冷却后,向每一试管(连同空白管)中加入85%硫酸5mL,滴加时间至少需要1min,需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出,在室温放置30min后比色。
5、样品比色测定
用1cm比色皿,以空白液调零点,于500nm波长测定吸光值。
6、标准曲线绘制
(1)加2g活性炭于50mL标准溶液中,振动1min后过滤。.