文档介绍：快速诊断PRRSV高热变异株和北美株的RT-PCR检测试剂盒的研究与应用第一部分文献综述1猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合征(PorcineReproductiveandRespiratory,PRRS),俗称“蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PorcineReproductiveandRespiratoryVirus,PRRSV)引起猪的一种繁殖障碍和呼吸系统的传染病,具有很强的传染性,不同年龄、品种和性别的猪均能感染,临床表现为母猪繁殖障碍,呈现流产、死胎、木乃伊胎及弱仔等症状,仔猪及育成猪主要表现为呼吸系统症状。本病于1987年在美国北卡罗来纳州首次发现,然后迅速向世界各地蔓延,先后在加拿大、日本、德国、荷兰、西班牙、法国、英国、丹麦等国家发生[1-7]。1991年初,我国台湾地区出现此病流行,于1996年分离到了引发该病的病原——猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),从而证实了本病在我国发生与蔓延的流行状况[8]。1995年孙颖杰等在我国进口美国的种猪中检测出5头种猪的病毒抗体呈阳性,同年中国农业科学院哈尔滨兽医研究所郭宝清等首次从国内疑似PRRS的猪场中分离到PRRSV,从而证实了本病在我国大陆地区的存在[9]。简中友等[10]对采自(1995-1996年)国内有生殖病史及疑似有PRRS猪场的47份血清样品进行检测也证实PRRS在我国已经存在并正在流行;随后有关本病在国内猪场频繁发生的报道就一直没有停止。现在本病己在世界各主要养猪国家和地区广泛存在和流行,已成为现代规模化养殖的主要疫病之一,严重影响养猪业的发展,给养猪业带来重大的经济损失。2猪繁殖与呼吸综合征病毒分子学研究进展猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种具囊膜的单股正链RNA病毒,归属于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属[11],与该科其他成员之间在病毒形态、基因组、复制方式和蛋白组成上相似,但它们之间并无血清学交叉反应。病毒粒子呈球形,直径45-65nm,十二面体对称,核衣壳约25-35nm,上有长约5nm突起,外绕一层脂质双层膜,易被脂溶性溶剂如***仿、***等溶解,在***-,-[12]。病毒无凝血性,不凝集猪、绵羊、山羊、牛、兔、豚鼠、鸡、鸭、鹅和人O型红细胞,但病毒用非离子除垢剂处理后,再用脂溶剂处理,则可凝集小鼠的红细胞。病毒对多种巨噬细胞具有亲噬性,包括肺泡巨噬细胞(PAM)、外周血单核细胞、肺血管内巨噬细胞(PAM)-72h可观察到特异的细胞病变,病毒量可达105-106/ml。猪脾巨噬细胞、脑小胶质细胞以及传代细胞系MA-104、Marc-145、CL-2621和CRL-1117等均可复制病毒。病毒在巨噬细胞中复制具有抗体依赖性病毒增强作用(ADE)。Yoon[13]的研究证实同一毒株对抗体的中和作用与抗体效价呈负相关,表明抗体的存在可增强对细胞的感染。PRRSV基因组存在高度变异性,通过氨基酸序列比较发现,PRRSV更接近于小鼠乳酸脱氢酶病毒(LDV)。根据病毒基因组的差异,PRRSV可分为两个血清型:欧洲型(LV株为代表株)和美洲型(-VR-2332株为代表株)[14],病毒的两个血清型间的氨基酸的同源性为78-81%,美国和欧洲分离的病毒毒株,在抗原特异性上存在差异。我国目前分离的PRRSV,应用多价血清和单克隆抗体检测,近似于美洲株,是否有欧洲型毒株存在尚不清楚。 PRRSV为不分节段、聚腺苷酸化、有囊膜的单链正股RNA病毒,其基因组长约为15kb,含有9个开放阅读框架(ORFs)[15],病毒基因组的每个阅读框和相邻阅读框有部分重叠。ORF1是最大的一个阅读框,长约12kb,约占病毒基因组的80%,包括ORF1a和ORF1b,位于基因组的5,端,编码病毒RNA聚合酶,其上有长约189个核苷酸的5,端非编码区,高度保守。ORF2和ORF7为编码病毒基因组的结构基因,主要编码病毒的功能性蛋白。在ORF7终止密码子之后是3,非编码区,含有poly(A)结构,其长度在14-23个核苷酸之间(平均长度为17个核苷酸)[16],在poly(A)尾上游有一个高度保守的八核苷酸序列。3,NCR在两种血清型毒株中的同源性尾76%,Meng等[16]认为这段序列的功能是聚合酶的结合区,用以启动负链RNA的合成。3PRRSV高热变异株和北美株概述2006年6月,我国部分地区养猪场发生了无名高热病,主要是猪繁殖与呼吸障碍综合征病的变异株引起的“高热病”或“无名高热病”,引起养猪界的恐慌,可谓我国养猪业的一场浩劫,造成严重的经济损失。该病引起了国务院和农业部的高度重视,世界动物卫生组织(IEO)及国际兽医界也投予关注目光。对此农业部组织相关部门进行科技公