文档介绍：膈膆葿专题1 基因工程蚅蚁蒅基因工程的概念膀薈羃基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术。个人收集整理勿做商业用途肅蒂节芁蚆袈(一)基因工程的基本工具蒄膂膅1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)肈聿肄(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。羃羂蒀(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。个人收集整理勿做商业用途膀***芈(3)结果:经限制酶切割产生的DN***段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。莃蚃羆2.“分子缝合针”——DNA连接酶膁芅肆(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较:肆蒃螂①相同点:都缝合磷酸二酯键。羈蚈蚇②区别:E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体,只能将双链DN***段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。个人收集整理勿做商业用途蒆膄蚆(2)与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DN***段的末端,形成磷酸二酯键。个人收集整理勿做商业用途肀螆袃3.“分子运输车”——载体袅蚀袁(1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。肁腿莀②具有一至多个限制酶切点,供外源DN***段插入。莄莀蒆③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。衿芇羅(2)最常用的载体是 质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。个人收集整理勿做商业用途螄膁芃(3)其它载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒羀莅袀膃袁***(二)基因工程的基本操作程序羁螈螂第一步::编码蛋白质的结构基因。,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。(1)原理:DNA双链复制螅肂蒀(2)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二步:冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。个人收集整理勿做商业用途蚇芇虿第二步::使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。:目的基因+启动子+终止子+标记基因薄薃袂(1)启动子:是一段有特殊结构的DN***段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质。个人收集整理勿做商业用途螀螈肈(2)终止子:也是一段有特殊结构的DN***段,位于基因的尾端。肃莃莈(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。个人收集整理勿做商业用途薇袆蚂第三步::是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。:膆薀膈将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法等。蚀莇螃将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。薅芀莃将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少,最常用的原核细胞是大肠杆菌,其转化方法是:先用Ca2+处理细胞,使其成为感受态细胞,再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。羅肁蚅第四步:,方法是采用DNA分子杂交技术。,方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。,方法是从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原-抗体杂交。。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。莈莈薂芃节薀(三):抗虫、抗病、抗逆转