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过表达转录因子对小脑颗粒神经元凋亡的影响!!!121111珻激活促使神经元凋亡,但其下游表达对小脑颗粒神经元的凋亡无明显影响,但抑制低钾处理诱导的小脑颗粒神经元凋亡。..甌神经元异常凋亡是神经退行性疾病的主要病理(Cyclindepend·基础论著·重要的转录因子在神经元凋亡中的作用尚不E2FIpE2FI293泶铮H緋空载体组作为对照,于转染、、笤擞肏33258胞的核固缩率吹蛲雎;转染蚿h12统计细胞凋亡率。结果成功构建泶镏柿#抑な蹈弥柿>哂凶B蓟钚浴S胱H緋空载pE2F1(P>005)pE2F1转染组和H咀楦呒卮砗蟮牡蛲雎史直鹞±%和ィ钜煳尥臣蒲б庖005)(423)(302)(P<005)关键词:;过表达;小脑颗粒神经元;凋亡R3381文献标识码:恼卤嗪牛,Abstract0bjective甅pointsthepoD±%,琣±%pE2FI[(302)](P<籄Med200936683-685)作者单位:阒菀窖г焊绞舻诙皆荷窬饪疲阒菀窖г荷窬蒲а芯克愣ü阒中山大学附属第三医院放射科,广东Wei-:;修回日期:(2009YB154)广州hZhongminlLI,猤,Ming-chan91LUNeurosurgerytheHospitalInstituteCoHegeGuangzhou珻;HospitalSunUniversityGuangzhou10630Chi-痭罞—甌,,.pE2F1mmolL..differenceBut瑃CGNsbut—mmoLL—·
万方数据
材料与方法pE2F1鼠,雌雄不拘,体质量约~(Invitrogen)(Hyclone)(HRP)(JacksonMonte)1%琼脂糖凝胶电泳分离、凝胶切割、提取获得。间,转化人大肠杆菌一。挑选阳性克隆扩pE2F1脂质体转染赴擞肳/胰酶的消化液中℃消化12gpE2FIpeDNA11pEGFP(GFP)1pE2F1pcDNA98ghPBS2(24)巳旧ǎ臣艷阳性小脑颗粒神经元的凋亡率。将转染皃巳旧ǎ臣艷阳性细胞的凋亡率。.尤倒置荧光显微镜下观察。存活神经元核无固缩,核数/全部计数细胞数×ァ<剖个以上细凋亡率差异采用单因素方差分析,凋亡率比较采用结果究过表达转录因子对小脑颗粒神经元凋亡的影响。1新生dSprague-Dawley(SD)g(固,,,美国Cruz)Tubulin(Sigma)(Promega);倒置荧光显微镜公司唤禾崛∈约梁)表达质粒的构建人基因编码区序列片段的获得:使用内HindHIEcoRVpRcFlagE2F1(自法国荒康腄片段经基因编码区片段用连接酶定向插入的癊位点之检测细胞的表达。3无菌条件下分离大鼠小脑,置于无的’撼逡74)..×疞的密度接种于经多聚赖氨酸预包被的培养皿中。接种后h10pmolL糖胞苷抑制非神经元细胞的生长和增殖,小脑颗粒神经元纯度达%以上。4小脑颗粒神经元转染参照钙磷转染试剂盒提供J(l)分析时转染穏6E2F1uciferase200pEFRL120buffer(PLB)速摇晃,收集细胞裂解液,室温离心。取样本裂解液“尤穕PLA测发光量,然后再加入,灭活报道基因荧光酶,同时使内参的荧光酶发光,检测发光量。两者的