文档介绍：袃袅实验名称:螃蛙类离体心脏灌流蚈芆羅羀莀羅课程名称:生理学实验肅莁螇指导教师:龙天澄张碧鱼陈笑霞肈膅螂实验人:叶永锋08344031蕿螆芅学院:海洋学院膂羇薅实验时间:2009年12月09日芅艿虿莄莅蚀膇莇蒄肁衿膆一、【目的要求】薄1、学习斯氏离体蛙心灌流法。蒂2、了解心肌的生理特性。芇3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)等对离体心脏活动的影响。袅蚄二、【原理】袃聿将离体蛙心(失去神经支配的蛙心)保持在适宜的环境中,在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩,心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境,离体心脏也是如此,离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响,可以通过改变灌流液的某些成分,观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性,都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时(),心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降,表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞,严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时,心脏收缩力增强,过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低,心肌收缩力减弱。血中钠离子浓度的轻微变化,对心肌影响不明显,只有发生明显变化时,才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强,乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。羈螄【实验仪器】肀青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、套管夹、%NaCl、5%NaCI、2%CaCl2、1%KCl、1:5000肾上腺素、1:10000乙酰肌碱、300U/mL肝素。螁蚇【方法与步骤】袄1、斯氏蛙心插管法蒀(1)一只青蛙,双毁髓后背位置于蜡盘中,按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线,于动脉圆锥处结扎(动物个体小时,结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线,并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管,然后将盛有少量(套管内2~3cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管,山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍后退,使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进,经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管,并使液面随心脏搏动而亡下移动,表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液,更换新鲜任氏液。稳定住套管后,轻轻提起备用线,将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液),再将结线固定在套管的小玻璃钩上,然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏,看清静脉窦的位置,于静脉窦下方剪断有牵连的组织,仅保留静脉窦与心脏的联系,使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血,使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(~2cm),即可进行实验。膈(2)将插好离体心脏的套管固定在支架上,用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过多,以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连(如右图)。注意:勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。蒅实验观察袄(1)记录正常心搏曲线袁(2)%NaCI溶液灌流,并作好加药标记,观察心搏变化。待曲线氏插管装置出现明显变化时,立即吸去套管中的灌流液,同时做好冲洗标记,并用新鲜任氏液清洗2—3次,待心搏恢复正常。注意:换液时切勿碰套管,以免影响描记曲线的基线,同时保持灌流液面一致(以下同)。羀观察可得,NaCI溶液会阻遏心脏搏动。芄(3)向套管内加2~6滴5%NaCI(较细的套管需少加)溶液,作好加药记号,观察心搏曲线的频率及振幅变化。当曲线出现明显变化时,应立即吸去套管中的灌流液,并做好冲洗标※记,迅速用新鲜任氏液清洗2~3次,待心搏恢复正常。羄(4)同法向套管内加入1~3滴2%CaCI:溶液,观察并记录心搏曲线的变化。当出现明显变化时,立即更换任氏液,待心搏恢复正常(如果恢复迟缓,可多次冲洗)。节(5)向套管中加1—2滴1%KCl溶液,记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时,同法更换灌流液,待心搏恢复正常。莈(6)同法记录套管中加入l~2滴的肾上腺素溶液(1:10000)后心搏曲线的变化。芇(7)同法记录套管中加入1—2滴乙酰胆碱溶液(1:10000)后心搏曲线的变化。肄3、实验结果与分析荿将记录到的各段心搏曲线附在实验报告中,计算给药前后曲线的频率、振幅和基线变化。测量结果填入表中。肀肆