文档介绍：膃人白细胞介素27(IL-27)酶联免疫分析(ELISA)罿试剂盒使用说明书葿本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆,组织及相关液体样本中白细胞介素27(IL-27)的含量。羅实验原理:袁本试剂盒应用夹心法测定标本中白细胞介素27(IL-27)水平。用纯化的人白细胞介素27(IL-27)抗体包被微孔板,往微孔中依次加入白细胞介素27(IL-27),再与HRP标记的白细胞介素27(IL-27)抗体结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素27(IL-27)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中白细胞介素27(IL-27)浓度。罿试剂盒组成:衿试剂盒组成蚇48孔配置羄96孔配置聿保存肆说明书肅1份蚃1份腿蒇封板膜袇2片(48)蒂2片(96)薂袈密封袋芅1个蒅1个薂艿酶标包被板羇1×48芄1×96蚂2-8℃保存蚀标准品:90ng/××1瓶螂2-8℃××1瓶袂2-8℃保存膈酶标试剂蚄3ml×1瓶袅6ml×1瓶羂2-8℃保存薈样品稀释液莆3ml×1瓶蚃6ml×1瓶肂2-8℃保存罿显色剂A液螄3ml×1瓶莂6ml×1瓶膂2-8℃保存肆显色剂B液蒆3ml×1瓶膁6ml×1瓶膁2-8℃保存蒇终止液羄3ml×1瓶膄6ml×1瓶芁2-8℃保存羈浓缩洗涤液蚆(20ml×20倍)×1瓶羃(20ml×30倍)×1瓶莁2-8℃保存荿膄样本处理及要求::室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(-)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。薇操作步骤薄标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为60ng/L,40ng/L,20ng/L,10ng/L,5ng/L)。蚁加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液50μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。芇温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。肅配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。节洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。螁加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。蚈温育:操作同3。螇洗涤:操作同5。肁显色