文档介绍：、实****地点和实****单位:袁2010年9月3日—:蒄(一)实****动员会羂2010年9月3日上午芀(二):(1)分组制订详细的实****方案。荿(2)分组选择和使用所需的仪器。芇(3)分组配制各种试剂、培养基并进行正确的消毒与灭菌。羄(三):(1)无菌操作倒平板、十倍稀释法、划线分离或涂布平板法,恒温培养蚅(2)菌落观察与镜检袂(3)筛选生产用菌株袀⑷菌种传代培养(菌种活化与扩大化)肅(四):(1)制备发酵液薅(2)接种发酵菌剂并发酵生产膆(3)观察发酵情况螁(4)品尝发酵产品,进行质量评价莀(5)记录结果芈(五)书写实****报告蚂时间::蚇1、实验药品新鲜乳酸饮料(市售)、脱脂奶粉、蔗糖、%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄)、75%乙醇、香柏油、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、碳酸钙;、(分析纯)、20gCaCO3固体、酵母膏20g、琼脂30g薀香柏油、脱脂奶粉100g、蔗糖10g;薇2、仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿(φ9或φ12)、试管、300ml三角瓶(带玻珠)、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针(环)、,通过与老师协商,将实验方案进一步详细化,最终确立了方案。、3个三角瓶、1个分液漏斗、10支移液管、2个量筒、2个洗个球、7个烧杯、一个台秤和一个试管架。,分装三角瓶,包扎,灭菌备用。肈BCG牛乳培养基配制羆A溶液:脱脂乳粉100g,水500ml,%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液1ml,80℃灭菌20min。(%溴甲苯酚绿(BCG),再加水至100ml制成)蚃B溶液:酵母膏10g,水500ml,琼脂20g,,121℃湿热灭菌20min。蒀以灭菌操作趁热将A溶液和B溶液混合均匀后倒平板。蒀结果与分析:莅两次用80℃灭菌A液制成的BCG培养基菌检结果都染菌了,培养基呈淡绿色;而用106℃灭菌A液制成的BCG培养基菌检结果没染菌。莄说明我们80℃对A液水浴灭菌达不到灭菌要求,最后都用106℃灭菌的A液制作BCG培养基。薁(2)样品的处理蕿按照无菌操作要求,从市售新鲜酸乳中吸取10ml检样,放入装有90ml无菌水的三角瓶内,振摇混匀。肈(3)分离方法肄①倒培养基蚂在无菌室,先用紫外线照射半小时把表面菌灭了,在通风10min后,每培养皿倾注约15ml左右已溶化的BCG牛乳培养基,立即放在桌上摇匀,冷却凝固后即成平板。蚇②十倍稀释法蒈将检样充分摇匀后,用十倍稀释法稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5各种稀释度的样品液。袅③分离莀直接用接种环蘸取10-4、10-5两个稀释度的试管中原液,在BCG牛乳培养基琼脂平板上划线分离,每稀释度做两个平皿。置40℃培养箱中培养48h。如出现圆形稍扁平的黄色菌落及周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。聿结果与分析:袇我们蘸取10﹣5,10﹣4两个稀释度同时接种到两个培养基时,发现传代后,只有一个培养基上长出少量黄色菌落;薅说明我们的检样浓度太低造成最后菌落太少,我们接下来都转而蘸取10﹣1,10﹣2两个稀释度的试管中原液,结果菌落比较多。,分装试管,包扎,灭菌备用。莆脱脂乳试管培养基成分:20g脱脂奶粉,285ml灭菌水。莅配制好的脱脂乳培养基分装到15支试管中。薃(2)选取经初步鉴定的乳酸菌典型菌落,用接种环挑取转至脱脂乳试管中,40℃培养箱中培养8~24h。若牛乳出现凝固,无汽泡,呈酸性,涂片镜检细胞为杆状或链球状(两种形状的菌种分别选入),革兰氏染色显阳性,则可将其连续传代4~6次,最终选择出在3~6h能凝固的牛乳管,作菌种待用薀螆革兰氏