文档介绍：章紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visiblespectrophotometry,UV-VIS)紫外-可见吸收光谱朗伯-比耳定律紫外-可见分光光度计分析条件的选择在医学检验中的应用研究物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱的分析方法称为紫外-可见分光光度法。紫外—可见分光光度法是利用某些物质的分子吸收200~800nm光谱区的辐射来进行分析测定的方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁,广泛用于无机和有机物质的定性和定量测定。紫外光谱的研究对象大多是具有共轭双键结构的分子前言第一节紫外—可见吸收光谱一、分子吸收光谱的产生在分子中,除了电子相对于原子核的运动外,还有核间相对位移引起的振动和转动。这三种运动能量都是量子化的,并对应有一定能级。下图为分子的能级示意图。分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图电子能级振动能级转动能级BA图中A和B表示不同能量的电子能级。在每一电子能级上有许多间距较小的振动能级,在每一振动能级上又有许多更小的转动能级。若用△E电子、△E振动、△E转动分别表示电子能级、振动能级转动能级差,即有△E电子△E振动△E转动。处在同一电子能级的分子,可能因其振动能量不同,而处在不同的振动能级上。当分子处在同一电子能级和同一振动能级时,它的能量还会因转动能量不同,而处在不同的转动能级上。所以分子的总能量可以认为是这三种能量的总和:E分子=E电子+E振动+~,此范围形成的光谱称为转动光谱或远红外光谱。~1eV,能量处于红外光区,故又称红外光谱(实际上为振动-转动光谱)。电子的跃迁能差约为1~20eV,比分子振动能级差要大几十倍,主要在真空紫外到可见光区,对应形成的光谱,称为电子光谱或紫外-可见吸收光谱。即电子光谱中总包含有振动能级和转动能级间跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带。(见教材P16,图3-2)大多数的分子光谱分析,都是用液体样品,加之仪器的分辨率有限,因而使记录所得电子光谱的谱带变宽。由于氧、氮、二氧化碳、水等在真空紫外区(60~200nm)均有吸收,因此在测定这一范围的光谱时,必须将光学系统抽成真空,然后充以一些惰性气体,如氦、氖、氩等。鉴于真空紫外吸收光谱的研究需要昂贵的真空紫外分光光度计,故在实际应用中受到一定的限制。我们通常所说的紫外—可见分光光度法,实际上是指近紫外、可见分光光度法。当用频率为的电磁波照射分子,而该分子的较高能级与较低能级之差△E恰好等于该电磁波的能量h时,即有△E=h(h为普朗克常数)此时,在微观上出现分子由较低的能级跃迁到较高的能级;在宏观上则透射光的强度变小。若用一连续辐射的电磁波照射分子,将照射前后光强度的变化转变为电信号,并记录下来,然后以波长为横坐标,以电信号(吸光度A)为纵坐标,就可以得到一张光强度变化对波长的关系曲线图——分子吸收光谱图。A10mg/L20mg/L30mg/L240220260280λ/nm不同浓度抗坏血酸在醋酸水溶液中的紫外吸收光谱图图表明,在波长241nm处,三种浓度都有最大吸收,且随浓度增大吸收光能力增强吸收曲线的意义:①同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax②不同浓度的同种物质,其吸收曲线形状相似λmax不变。特定波长下吸光度有差异,在λmax处吸光度的差异最大。此可作作为物质定量分析的依据。③吸收曲线可以提供物质的结构信息,并作为物质定性分析的依据之一。④不同物质,它们的吸收曲线形状和λmax则不同。⑤在λmax处测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。-胡罗卜素咖啡因阿斯匹林***几种有机化合物的分子吸收光谱图。